[發明專利]功能化視網膜色素上皮細胞移植片的制備方法

有效

• 申請號: 201310631831.4
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103656742A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 金子兵;向萍;李敏;項略
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學;福建師范大學
• 主分類號: A61L27/26
• 分類號: A61L27/26;A61L27/24;A61L27/22;A61L27/18;A61L27/56;A61L27/50;D04H1/4382;D04H1/728
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種功能化視網膜色素上皮細胞移植片的制備方法，其特征在于，以納米仿生Bruch’s膜作為視網膜色素上皮細胞載體，將視網膜色素上皮細胞接種到所述納米仿生Bruch’s膜上，在低血清、低糖培養條件下復合培養，構建得到所述功能化視網膜色素上皮細胞移植片；其中，所述納米仿生Bruch’s膜是將原料柞蠶絲素蛋白、聚己內酯、明膠溶于有機溶劑中形成靜電紡絲溶液，利用靜電紡絲法對前述靜電紡絲溶液進行靜電紡絲所制得的超薄多孔的柞蠶絲素蛋白/聚己內酯/明膠復合納米纖維膜。

2.如權利要求1中所述的制備方法，其特征在于，所述功能化視網膜色素上皮細胞移植片可根據需要裁剪成0.5-4mm²大小的移植單元。

3.如權利要求1中所述的制備方法，其特征在于，所述接種的方法為：所述視網膜色素上皮細胞體外培養至細胞融合后，以0.05％胰蛋白酶-EDTA消化，取密度為1×10⁶/mL的視網膜色素上皮細胞懸液400μL至所述納米仿生Bruch’s膜的表面，將所述視網膜色素上皮細胞懸液涂布均勻，移至二氧化碳培養箱中培養；補加培養基繼續培養；待所述視網膜色素上皮細胞融合成單層時，更換低糖低血清培養基繼續培養。

4.如權利要求1中所述的制備方法，其特征在于，所述柞蠶絲素蛋白、聚己內酯、明膠的質量為比1-5％∶65-85％∶10-30％。

5.如權利要求1中所述的制備方法，其特征在于，在接種視網膜色素上皮細胞之前，所述納米仿生Bruch’s膜的預處理為：將所述納米仿生Bruch’s膜置入細胞培養板或細胞培養皿中，加入75％乙醇浸泡，然后除去乙醇，PBS或HBSS緩沖液浸泡后晾干。

6.如權利要求1中所述的制備方法，其特征在于，所述視網膜色素上皮細胞為原代分離的或干細胞分化的或經基因修飾的視網膜色素上皮細胞。

7.如權利要求1中所述的制備方法，其特征在于，所述低糖低血清培養基為在含1g/L葡萄糖和110mg/L丙酮酸鈉的DMEM基礎培養基中添加1％胎牛血清與1％青鏈霉素。

8.一種功能化視網膜色素上皮細胞移植片，其特征在于，其包括：納米仿生Bruch’s膜、以及種植在所述納米仿生Bruch’s膜上的視網膜色素上皮細胞；其中，所述納米仿生Bruch’s膜作為視網膜色素上皮細胞的載體。

9.一種按權利要求1中所述方法制備得到的功能化視網膜色素上皮細胞移植片。