[發明專利]從大興安嶺野生牧馬豆中高效提取總生物堿的新方法

有效

• 申請號: 201310631037.X
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN103626770A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 張亞紅;信小娟
• 申請（專利權）人: 大興安嶺嘉迪歐營養原料有限公司
• 主分類號: C07D471/18
• 分類號: C07D471/18;C07D471/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種采用生物酶解技術，超高壓藕聯亞臨界水提取，酶法分離精制再采用高速逆流色譜法分離純化，最終得到高純度總生物堿的方法，其步驟如下：

(1)生物破壁：牧馬豆種子加入果膠酶與纖維素酶、半纖維素素酶混合酶解，在一定酶濃度，PH值3-4，酶解時間2-3h；

(2)超高壓提取：按一定料液比加入加入亞臨界水，以適當壓力、時間加壓兩次；

(3)酶法分離精制：提取液添加一定量的木瓜蛋白酶和淀粉酶，將提取液中的蛋白質、淀粉降解為小分子物質除去，改善水提取液的過濾難問題，提高澄清度和純度；

(4)微濾：粗提液用適當的微孔膜過濾，膜壓力0.2-0.4MPa，過濾溫度50-60℃；

(5)結晶：過濾后液體初步濃縮，濃縮粉按一定的量加鹽酸溶液，加氨水調至中性，加熱溶解，濃縮后放置過夜，析出結晶，過濾，分離晶體；

(6)分相：稱取總生物堿提取物，選擇HSCCC溶劑系統，按比例將各種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜。分相平衡后分出上相和下相；

(7)HSCCC純化：以溶劑系統的上相為固定相，下相為流動相，調整轉速，以一定流速泵入流動相，純化總生物堿提取物；

(8)檢測：采用高效液相色譜法，紫外檢測器在一定波長進行檢測，得純度為90％以上的總生物堿。

2.根據權利要求1所述的一種采用生物酶解技術，超高壓藕聯亞臨界水提取，酶法分離精制再采用高速逆流色譜法分離純化，最終得到高純度總生物堿的方法，其特征是：在所述的步驟(1)中，果膠酶與纖維素酶、半纖維素素酶比例為1：1：1、1：2：1、1：2：2，酶濃度為0.3-0.5g／kg，酶解溫度40-50(。

3.根據權利要求2所述的一種采用生物酶解技術，超高壓藕聯亞臨界水提取，酶法分離精制再采用高速逆流色譜法分離純化，最終得到高純度總生物堿的方法，其特征是：在所述的步驟(2)中，料液比為1：8-12，超高壓力為200-400MPa，加壓時間5-8min。

4.根據權利要求3所述的一種采用生物酶解技術，超高壓藕聯亞臨界水提取，酶法分離精制再采用高速逆流色譜法分離純化，最終得到高純度總生物堿的方法，其特征是：在所述的步驟(3)中，木瓜蛋白酶和淀粉酶比例為1：1、2：1、1：2，添加量為1.0-1.5‰。

5.根據權利要求4所述的一種采用生物酶解技術，超高壓藕聯亞臨界水提取，酶法分離精制再采用高速逆流色譜法分離純化，最終得到高純度總生物堿的方法，其特征是：在所述的步驟(4)中，微孔過濾膜為0.5-0.8um。

6.根據權利要求5所述的一種采用生物酶解技術，超高壓藕聯亞臨界水提取，酶法分離精制再采用高速逆流色譜法分離純化，最終得到高純度總生物堿的方法，其特征是：在所述的步驟(6)中，HSCCC溶劑系統為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(4：2：3：1)、氯仿-甲醇-水(4：3：2)、正丁醇-乙酸乙酯-水(5：4：2)中的任意一種。

7.根據權利要求6所述的一種采用生物酶解技術，超高壓藕聯亞臨界水提取，酶法分離精制再采用高速逆流色譜法分離純化，最終得到高純度總生物堿的方法，其特征是：在所述的步驟(7)中，轉速700-900r／min，流動相流速為2.0-3.0mL／min。