[發(fā)明專利]提高小豹斑鵝膏菌絲體產(chǎn)毒能力的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310630187.9
• 申請(qǐng)日: 2013-12-02
• 公開（公告）號(hào): CN103627757A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李宗菊;馮遼遼;張曦予;趙昱;左奎;程霞;唐萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/00
• 分類號(hào): C12P21/00;C12R1/645
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種提高小豹斑鵝膏菌絲體產(chǎn)毒能力的方法，其特征為，將經(jīng)過(guò)固體培養(yǎng)誘導(dǎo)并擴(kuò)繁的菌絲體，轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)階段，培養(yǎng)基中同時(shí)加入復(fù)合氨基酸及微量的子實(shí)體干粉，培養(yǎng)25～28天，菌絲產(chǎn)生的α-鵝膏毒肽總量為2330～3015μg/g._干重，為固體培養(yǎng)時(shí)的5.5～7.2倍。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高小豹斑鵝膏菌絲體產(chǎn)毒能力的方法，其特征為，菌絲體的誘導(dǎo)及擴(kuò)繁方法如下：在云南武定獅子山，采摘生長(zhǎng)健狀、未完全開傘的幼嫩子實(shí)體；取菌蓋與菌柄交接處的內(nèi)部無(wú)菌組織塊約0.3cm²大小，嵌入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基成分為：馬鈴薯200g/L、葡萄糖20g/L、MgSO₄1.00g/L、CaCl₂?1.00g/L、KH₂PO₄?0.50g/L、NH₄NO₃?0.35g/L、KNO₃?0.35g/L、維生素B₁?0.10mg/L、16.0波美的麥芽汁180ml、瓊脂10.00g/L，控制培養(yǎng)基PH值為5.6，在23～24℃下暗培養(yǎng)40～45天，組織塊隆起，表面長(zhǎng)出團(tuán)狀、稠密的絨毛狀白色菌絲；將菌絲在固體擴(kuò)大培養(yǎng)基中擴(kuò)繁8～10代，每代培養(yǎng)48～55天后，擴(kuò)繁的菌絲及培養(yǎng)基中α-鵝膏毒肽總含量平均為420±25μg/g._干重，其所述的擴(kuò)大培養(yǎng)基成分為：馬鈴薯200g/L、葡萄糖20g/L、MgSO₄1.00g/L、CaCl₂?1.00g/L、KH₂PO₄?0.50g/L、腐熟滇青岡葉子粉40～50g/L、16.0波美的麥芽汁180ml、瓊脂10.00g/L，控制培養(yǎng)基PH值為5.6。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌絲體擴(kuò)大培養(yǎng)方法，其特征為，擴(kuò)大培養(yǎng)基中，腐熟滇青岡葉子粉的制備方法如下：在武定獅子山收集滇青岡葉子，帶回實(shí)驗(yàn)用地，按4：1～5：1的比例與豬糞拌勻，按葉子重量的0.5～1.0%加入尿素，混勻，加水至葉子濕透，上面覆蓋遮陰網(wǎng)，前1個(gè)月每隔4～5天揭開遮陰網(wǎng)，里外翻勻，加水濕透，然后再靜止發(fā)酵2～3個(gè)月，其間，看情況10～15天補(bǔ)水一次，90～120天后，將已腐熟的葉子攤開，曬干，粉碎，過(guò)80目分樣篩即可。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高小豹斑鵝膏菌絲體產(chǎn)毒能力的方法，其特征為，液體培養(yǎng)方法如下：將經(jīng)過(guò)固體平板培養(yǎng)的菌絲體，用直徑為6mm的無(wú)菌打孔器，無(wú)菌條件下切取菌片，轉(zhuǎn)入含100ml液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，每瓶接種6塊，置于轉(zhuǎn)速為150r/min、溫度為24℃的搖床上培養(yǎng)，其所述的液體培養(yǎng)基成分為：馬鈴薯200g/L、葡萄糖20g/L、MgSO₄1.00g/L、CaCl₂?1.00g/L、KH₂PO₄?0.50g/L、腐熟滇青岡葉子粉水提液200～250?ml/L、16.0波美的麥芽汁180ml，控制培養(yǎng)基PH值為5.6，其中，腐熟滇青岡葉子粉水提液的制備方法如下：取權(quán)利要求3中的腐熟滇青岡葉子粉100g，加入800～1000ml蒸餾水，加熱煮沸1～1.5hr，過(guò)濾，濾液加熱濃縮成200～250ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高小豹斑鵝膏菌絲體產(chǎn)毒能力的方法，其特征為，所述的復(fù)合氨基酸組成為谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸，四種氨基酸的加入量分別為谷氨酸0.40～0.60g/L，甘氨酸1.00～1.20g/L，丙氨酸1.00～1.20g/L，異亮氨酸0.50～0.60g/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高小豹斑鵝膏菌絲體產(chǎn)毒能力的方法，其特征為，子實(shí)體干粉的加入方法如下：將小豹斑鵝膏子實(shí)體在50～60℃下烘干，粉碎，過(guò)120目分樣篩，按0.005～0.008g/L的量加入到液體培養(yǎng)基中。