[發明專利]液相色譜串接質譜聯用儀（LC-MS/MS）檢測橄欖油中的葉綠素銅鈉的檢測方法

有效

• 申請號: 201310629900.8
• 申請日: 2013-12-02
• 公開（公告）號: CN104678000A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 周洪斌;李平;肖震;陳桐
• 申請（專利權）人: 鎮江出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海瀚橋專利代理事務所(普通合伙) 31261
• 代理人: 胡思棉

技術領域

本發明涉及食品添加劑檢測領域，尤其是指用于非法添加在橄欖油中葉綠素銅鈉的檢測。

背景技術

葉綠素銅鈉作為食品添加劑，被允許在冷凍飲品、蔬菜罐頭、熟制豆類、加工堅果、糖果、烘烤食品、果蔬汁、配制酒等食品中作為著色劑使用，不得超過500ppm。但是葉綠素銅鈉在油脂中是禁用的。在國內外文獻和檢測標準記載中，目前測定葉綠素銅鈉的方法非常有限，絕大多數方法均采用分光光度法（如GB/T23749-2009）。由于葉綠素銅鈉在GB2760上是允許使用的食品添加劑，其添加量比較大，最高限量500ppm，這些檢測方法主要是檢測其含量的多少，定量限相對比較高（比如GB/T23749-2009的定量限為5ppm），很容易被檢出。近年來，由于橄欖油相對于普通油脂更具健康功效，橄欖油更易被大眾接受。因此，一些商家違背法律在油脂中禁用葉綠素銅鈉的禁令，違禁在大豆油中摻加葉綠素銅鈉冒充橄欖油謀取暴利。這種在大豆油中添加葉綠素銅鈉的假冒橄欖油，長期食用，會對人體的肝腎造成損害，或導致貧血。因此，檢測油脂中的非法添加劑葉綠素銅鈉迫在眉睫。添加在大豆油或其他油脂中的葉綠素銅鈉其含量較低，采用目前的分光光度法比較難以檢測，因此需要更加可靠、更加準確、高靈敏度的方法來定性定量檢測這種物質在油脂中的存在。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種針對橄欖油脂中添加葉綠素銅鈉的檢測方法，該檢測方法更加可靠、準確，靈敏度高，檢出限低。

為解決上述技術問題，本發明提供的技術方案是一種液相色譜串接質譜聯用儀（LC-MS/MS）檢測橄欖油中的葉綠素銅鈉的檢測方法，其包括如下步驟：1）樣品前處理，2）用液相色譜-質譜聯用定性定量檢測葉綠素銅鈉的色譜質譜條件：采用的流動相的水相為5-20mmoL/L?的乙酸銨水溶液，有機相為甲醇；流速250uL/min恒流進樣等度洗脫，其中甲醇體積占80～100%；乙酸銨水溶液體積占0～20%；母離子613.3?m/z，子離子465.6?m/z和子離子479.9?m/z。一種液相色譜串接質譜聯用儀（LC-MS/MS）檢測食用油中的葉綠素銅鈉的檢測方法，其包括如下步驟：1）樣品前處理，2）用液相色譜-質譜聯用法定性定量檢測葉綠素銅鈉的色譜質譜條件：采用的流動相的水相為5-20mmoL/L?的乙酸?銨水溶液，有機相為甲醇；流速250uL/min恒流進樣，其中所述流動相中按體積百分比計，所述甲醇80～100%；所述乙酸銨水溶液0～20%；檢測母離子613.3?m/z，定量子離子465.6?m/z、碰撞能量56V，定性子離子479.9?m/z、碰撞能量38V。

所述液相色譜-質譜聯用法中，離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描模式：正離子；多反應檢測（SRM）。?

液相色譜-質譜聯用法中，噴霧電壓4000V，傳輸毛細管溫度350℃，殼氣壓力?20arb。

液相色譜-質譜聯用法中，色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

所述流動相的水相為5-20?m?mol/l?的乙酸?銨水溶液。

所述樣品前處理步驟為稱取食用油樣品0.700g，加入甲醇水混合溶液2mL，混合均勻，；加入乙醚2-4mL，混合均勻；20℃條件下5000rpm離心20分鐘；取水相層過水相膜待用；所述甲醇水混合溶液中，體積百分比計，甲醇占60-90%。

本發明的高效液相色譜串接質譜聯用儀檢測橄欖油中非法添加的葉綠素銅鈉的檢測方法，可以更加準確、可靠、高靈敏度的定性定量檢測出橄欖油中的葉綠素銅鈉。由于其檢測限量較低，也可以廣泛的用于對橄欖油產品中的天然葉綠素銅鈉含量的分析普查。

附圖說明

圖1，本發明中的子離子CID圖譜。

圖2，葉綠素銅鈉標準曲線圖。

圖3，葉綠素銅鈉標準溶液色譜圖。

圖4，橄欖油陰性樣品的檢測色譜圖。

圖5，橄欖油陰性樣品中加標0.030?mg/kg的檢測色譜圖。

圖6，橄欖油陰性樣品中加標0.060?mg/kg的檢測色譜圖。

具體實施方式

針對本發明的檢測方法，結合附圖進行具體說明。

本發明的液相色譜串接質譜聯用儀對橄欖油中非法添加的葉綠素銅鈉進行定性定量檢測方法中，

液相色譜串接質譜聯用儀的條件：