[發明專利]miR-216在制備促進成骨分化的藥物中的用途

在審

• 申請號: 201310629480.3
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN104667294A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 趙春華;李唐平;李紅凌
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P19/08
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

技術領域

本領域涉及再生醫學領域，具體而言涉及miRNA在制備促進成骨分化的藥物中的用途。

背景技術

人間充質干細胞（hMSC_s）具有自我更新和多譜系分化潛能，在適當條件下能夠分化為骨、軟骨、脂肪和肌組織（Prockop,DJ，1997；Phinney,DG，2007；Pittenger,MF等人，1999和Fink,T等人，2011）。研究者首先從骨髓中分離出MSC（BMSC_s），并證明了其多系分化的能力。BMSC_s向成骨細胞分化是機體普遍存在的生理過程。在生理條件下，骨組織呈現成骨細胞的骨形成和破骨細胞的骨吸收的動態平衡。一旦各種原因導致這種動態平衡破壞，如成骨分化能力降低時，就會引起骨質疏松、鎖骨顱骨發育不全、股骨頭壞死、關節退行性變、脊柱側彎等骨相關疾病。因此，揭示間充質干細胞成骨的調控機制具有極其重要的臨床應用價值。

由于受來源的限制以及取樣困難，BMSC的研究和應用發展較慢。后來的研究發現，除骨髓外，MSC還廣泛存在于脂肪、皮膚、滑液、脫落的牙齒、羊水和胎盤等多種組織器官中（Prockop,DJ，1997）。研究證明，與骨髓來源的MSC相似，人脂肪組織來源的MSC（hAMSC_s）具有跨系甚至跨胚層的多向分化潛能，在體內外可分化成多種細胞類型，如成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、肌細胞、內皮細胞、神經膠質細胞等。此外與BMSC相比，hAMSC_s具有原料充足，取材方便，體外分離擴增方法簡單易行等優點，因此備受研究者青睞。目前hAMSC_s已經成為研究MSC自我更新和分化的最佳細胞模型和最有發展潛力的組織工程種子細胞。

MicroRNA_s（miRNA_s）是一類高度保守的非編碼小RNA分子，能夠在轉錄或轉錄后水平調控靶基因表達（Ambros,V，2004；Bartel,DP，2004）。最近，越來越多的證據表明miRNA_s能夠調控細胞分化和命運決定（Ivey,KN?and?D?Srivastava，2010）。目前，miR-125、miR-133、miR-135、miR-138、miR-181、miR-206、miR-9、miR-27、miR-196a、miR-214、miR-764-5p、miR-2861、miR-3960、miR-642a-3p、miR-141/200a和miR-17-5p～92/miR-106a等許多miRNA_s已經被證實參與成骨分化的調控。miR-214轉基因小鼠表現出明顯的成骨能力降低（Wang,X，2013）。這些研究結果提示，miRNA_s在MSC的成骨分化調控中可能扮演了非常重要的角色。

發明內容

根據一些具體實施方式，本發明提供miR-216在制備促進成骨分化的藥物中的用途。

在一些具體實施方式中，miR-216促進人脂肪組織來源的間充質干細胞向成骨分化。

在一些具體實施方式中，miR-216的序列如SEQ?ID?No.1所示。SEQ?ID?No.1為UAAUCUCAGCUGGCAACUGUGA，其登錄號為miRbase?Accession?number?MIMAT0000273。

在一些具體實施方式中，通過轉染試劑提供miR-216；轉染試劑優選為脂質體。在一些具體實施方式中，轉染試劑是Lipofectamine2000。

在一些具體實施方式中，miR-216的轉染濃度為100nmol/L。

附圖說明

圖1：hAMSC_s經成骨誘導培養基誘導后3天的ALP染色。

圖2：hAMSC_s經成骨誘導培養基誘導后12天的茜素紅染色。

圖3A：轉染NC對照后，hAMSC_s的ALP染色。

圖3B：轉染miR-216a后，hAMSC_s的ALP染色。

圖4A：轉染NC對照后，hAMSC_s的茜素紅染色。

圖4B：轉染miR-216a后，hAMSC_s的茜素紅染色。