[發明專利]黑胸敗血芽孢桿菌穿孔毒素蛋白及其重組表達載體和應用

有效

• 申請號: 201310629013.0
• 申請日: 2013-11-28
• 公開（公告）號: CN103626854A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 程廷才;林平;金盛凱;常懷譜;夏慶友
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C07K14/32
• 分類號: C07K14/32;C12N15/31;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;A01N47/44;A01P7/04;C12R1/07
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.黑胸敗血芽孢桿菌穿孔毒素蛋白，其特征在于：氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。

2.權利要求1所述黑胸敗血芽孢桿菌穿孔毒素蛋白的編碼基因。

3.根據權利要求2所述的編碼基因，其特征在于：所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

4.含有權利要求2所述編碼基因的重組表達載體。

5.根據權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于：所述重組表達載體是將SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列連入pET28a載體的BamH?I和Xho?I酶切位點而得。

6.含有權利要求4或5所述重組表達載體的工程菌。

7.根據權利要求6所述工程菌，其特征在于：所述工程菌為大腸桿菌BL21。

8.利用權利要求7所述工程菌制備黑胸敗血芽孢桿菌穿孔毒素蛋白的方法，其特征在于：將工程菌用IPTG誘導表達，離心收集菌體，PBS清洗后用液氮反復凍融，然后超聲波破碎收集沉淀；沉淀分別用含質量分數為0.5%的Triton?TM?X-100、0.1～0.3Mm?EDTA的PBS和含2M尿素、100mM?NaCl的PBS清洗；再用含8M尿素、100mM?NaCl的PBS重懸沉淀，使包涵體充分溶解；離心收集上清，抽濾，濾液用含有尿素的PBS透析；最后用PBS溶液透析，然后用Ni親和柱純化，用PBS溶液和含有20mM咪唑的PBS洗去未結合的蛋白后，再分別用含200mM、500mM和1M咪唑的PBS洗脫，最后用PBS溶液透析，得黑胸敗血芽孢桿菌穿孔毒素蛋白。

9.權利要求1所述黑胸敗血芽孢桿菌穿孔毒素蛋白在制備生物農藥殺蟲劑中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述黑胸敗血芽孢桿菌穿孔毒素蛋白在制備抗鱗翅目害蟲的生物農藥殺蟲劑中的應用。