[發明專利]抗腫瘤多肽和透明質酸酶藥物組合物及其制備方法

在審

• 申請號: 201310628302.9
• 申請日: 2013-11-28
• 公開（公告）號: CN104667293A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 劉飛;釗倩倩;朱希強;王紹花;袁超;陳勉;劉霞;侯重文;袁丹丹;張林軍
• 申請（專利權）人: 山東省生物藥物研究院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K38/19;A61K47/42;A61P35/00;C12N1/19;C12N15/81;C12N9/26;C12P21/02;A61K38/47;C12R1/84
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種利用基因調控制備抗腫瘤多肽和透明質酸酶組合物。

2.一種用于表達抗腫瘤多肽和透明質酸酶組合物的基因工程菌株，其特征是包含編碼抗腫瘤多肽和透明質酸酶的核苷酸序列，或包含表達抗腫瘤多肽的重組載體和表達透明質酸酶的重組載體。

3.權利要求2所述的基因工程菌株，其特征是命名為畢赤酵母（Pichia?pastoris）GS115-pGAPZaA-lrr5-pPIC9-rhPH20，其保藏號為CGMCC?No.8350。

4.權利要求2所述的基因工程菌株，其特征是將表達抗腫瘤多肽的重組載體和表達透明質酸酶的重組載體依次轉入畢赤酵母菌株GS115體內所得到的重組畢赤酵母菌株。

5.權利要求2和4任一所述的表達抗腫瘤多肽的重組載體，其特征是一種組成型表達載體，含有編碼抗腫瘤多肽的核苷酸序列，編碼抗腫瘤多肽的核苷酸序列連入質粒pGAPZaA上得到的重組質粒，命名為pGAPZaA-lrr5。

6.權利要求2和4任一所述的表達透明質酸酶的重組載體，其特征是一種誘導型表達載體，含有編碼透明質酸酶的核苷酸序列，編碼透明質酸酶的核苷酸序列連入質粒pPIC9上所得到的重組質粒，命名為pPIC9-rhPH20。

7.權利要求2和5任一所述的編碼抗腫瘤多肽的核苷酸序列，其特征是在不改變其氨基酸序列的基礎上，依據畢赤酵母密碼子偏愛性優化得到包含序列2的核苷酸序列。

8.權利要求2和6任一所述的編碼透明質酸酶的核苷酸序列，其特征是在不改變其氨基酸序列的基礎上，依據畢赤酵母密碼子偏愛性優化得到包含序列4的核苷酸序列。

9.權利要求1所述的組合物的制備方法，其特征是將重組菌株GS115-pGAPZaA-lrr5-pPIC9-rhPH20接種培養，然后按照5%～10%接種量接種于發酵基礎鹽培養基中；通氣攪拌培養，在整個培養過程中氧氣飽和度不低于20%；14～24h后，加入甲醇，使甲醇的終濃度維持在0.1%～1%，繼續培養24～48h；停止加入甲醇，繼續培養5～8h至碳源耗盡；按照2～8ml/(h·L)的流量加入30%～50%甘油，繼續培養48～72h。

10.權利要求1和9任一所述的組合物，其特征是由抗腫瘤多肽LRR5和透明質酸酶rhPH20以100:2～10（μg:U）比例組成。