[發(fā)明專利]鑒定小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型的方法及其專用標記有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310625539.1 | 申請日： | 2013-11-28 |
| 公開（公告）號： | CN103667464A | 公開（公告）日： | 2014-03-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郝晨陽;秦琳;候健;王玉泉;李甜;張學勇 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 關(guān)暢 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 鑒定 小麥 粒重 基因 tagw2 啟動 子區(qū) 單元 方法 及其 專用 標記 | ||
1.用于鑒定小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型的試劑盒，含有如下（a）-（c）：
（a）引物對1和限制性內(nèi)切酶BstNI；所述引物對1為由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；
（b）引物對2和引物對3；所述引物對2為由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；所述引物對3為由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對；
（c）引物對4和限制性內(nèi)切酶Hpy166II；所述引物對4為由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對。
2.用于鑒定小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型的試劑盒，含有引物對1和限制性內(nèi)切酶BstNI；所述引物對1為由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對。
3.利用權(quán)利要求1所述的試劑盒鑒定小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型的方法，包括如下步驟：
（1）如下a1）和a2）：
a1）以待測小麥的基因組DNA為模板，采用所述引物對1進行PCR擴增，得到PCR產(chǎn)物1；再用所述限制性內(nèi)切酶BstNI酶切所述PCR產(chǎn)物1，得到酶切產(chǎn)物1；
a2）根據(jù)步驟a1）所得的酶切產(chǎn)物1，按照如下方法確定所述待測小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型：若所得酶切產(chǎn)物1含有1361bp的DNA片段，則所述待測小麥具有或候選具有Hap-6B-1型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型，鑒定完畢；若所得酶切產(chǎn)物1不含有1361bp的DNA片段，則所述待測小麥不具有或候選不具有Hap-6B-1型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型，繼續(xù)如下步驟（2）；
（2）如下b1）和b2）：
b1）以所述待測小麥的基因組DNA為模板，采用所述引物對2和所述引物對3進行PCR擴增，得到PCR產(chǎn)物2；
b2）根據(jù)步驟b1）所得的PCR產(chǎn)物2，按照如下方法確定所述待測小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型：若所得PCR產(chǎn)物2含有652bp的DNA片段，則所述待測小麥具有或候選具有Hap-6B-2型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型，鑒定完畢；若所得PCR產(chǎn)物2不含有652bp的DNA片段，則所述待測小麥不具有或候選不具有Hap-6B-2型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型，繼續(xù)如下步驟（3）；
（3）如下c1）和c2）：
c1）以所述待測小麥的基因組DNA為模板，采用所述引物對4進行PCR擴增，得到PCR產(chǎn)物3；再用所述限制性內(nèi)切酶Hpy166II酶切所述PCR產(chǎn)物3，得到酶切產(chǎn)物2；
c2）根據(jù)步驟c1）所得的酶切產(chǎn)物2，按照如下方法確定所述待測小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型：若所得酶切產(chǎn)物2含有248bp的DNA片段，則所述待測小麥具有或候選具有Hap-6B-3型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型；若所得酶切產(chǎn)物2含有228bp的DNA片段，則所述待測小麥具有或候選具有Hap-6B-4型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型。
4.利用權(quán)利要求2所述試劑盒鑒定待測小麥是否具有Hap-6B-1型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型的方法，包括如下步驟：
（A1）以待測小麥的基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求3中所述引物對1進行PCR擴增，得到PCR產(chǎn)物1；再用限制性內(nèi)切酶BstNI酶切所述PCR產(chǎn)物1，得到酶切產(chǎn)物1；
（A2）根據(jù)步驟（A1）所得的酶切產(chǎn)物1，按照如下方法確定所述待測小麥是否具有Hap-6B-1型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型：若所得酶切產(chǎn)物1含有1361bp的DNA片段，則所述待測小麥具有或候選具有Hap-6B-1型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型；若所得酶切產(chǎn)物1不含有1361bp的DNA片段，則所述待測小麥不具有或候選不具有Hap-6B-1型的小麥粒重基因TaGW2-6B啟動子區(qū)單元型。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于：采用所述引物對1進行PCR擴增的退火溫度為64℃；采用所述引物對2進行PCR擴增的退火溫度為61℃；采用所述引物對3進行PCR擴增的退火溫度為62℃；采用所述引物對4進行PCR擴增的退火溫度為63℃。
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