[發(fā)明專利]一種人工DNA分子及表達目標基因的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310625428.0 | 申請日： | 2013-11-29 |
| 公開（公告）號： | CN103834657A | 公開（公告）日： | 2014-06-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 皮文輝;周平;劉守仁;張云生;張譯元;唐紅;楊華;王立民;王新華 | 申請（專利權(quán)）人： | 新疆農(nóng)墾科學(xué)院 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/63;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京鼎佳達知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 王偉鋒;劉鐵生 |
| 地址： | 832000 新疆維*** | 國省代碼： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 人工 dna 分子 表達 目標 基因 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及遺傳工程技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種人工DNA分子，及利用該人工DNA分子表達目標基因的方法。?
背景技術(shù)
綿羊β-酪蛋白基因在乳腺中高表達，皮膚和有毒T淋巴細胞(cytotoxic?T?lymphocytes)中也能表達。酪蛋白是綿羊乳中主要的蛋白組份，根據(jù)結(jié)構(gòu)劃分為4類：αs1、αs2、β和κ。乳腺組織中，4種酪蛋白基因mRNA翻譯效率不同，αs1和β的mRNA翻譯效率是αs2和κ的3至4倍。綜上所述，β-酪蛋白基因位點是制備乳腺生物反應(yīng)器的合適靶點。?
為證實β-酪蛋白基因啟動子驅(qū)動的表達框是否有效，Kolb等(1999)采用乳腺上皮細胞。國內(nèi)乳腺生物反應(yīng)器研究方面，也采用乳腺上皮細胞驗證表達框的有效性。如果能夠在綿羊成纖維細胞中激活β-酪蛋白基因啟動子，檢測重組表達框的表達結(jié)果，將為綿羊乳腺生物反應(yīng)器的構(gòu)建提供直接方便的檢測技術(shù)。?
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種人工DNA分子，及利用該人工DNA分子表達目標基因的方法。?
本發(fā)明中術(shù)語“TALE”是指轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)子。?
本發(fā)明中術(shù)語“TALE-TFs”是指TALE轉(zhuǎn)錄因子，即TALE?transcription?factors。?
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：?
能夠編碼TALE-TFs的人工DNA分子，所述人工DNA分子的堿?基序列為SEQ?ID?NO.2，能夠編碼TALE-TF1，所述TALE-TF1能夠識別SEQ?ID?NO.1中的28-48位；或所述人工DNA分子的堿基序列為SEQ?ID?NO.3，能夠編碼TALE-TF2，所述TALE-TF2能夠識別SEQ?ID?NO.1中的42-62位；或所述人工DNA分子的堿基序列為SEQ?ID?NO.4，能夠編碼TALE-TF3，所述TALE-TF3能夠識別SEQ?ID?NO.1中的56-76位。?
本發(fā)明還提供一種表達載體，所述表達載體包含權(quán)利要求1所述的人工DNA分子，其能夠表達TALE-TF1、TALE-TF2或TALE-TF3。?
本發(fā)明還提供一種重組細胞，所述重組細胞是用權(quán)利要求2所述表達載體轉(zhuǎn)化的原核細胞或真核細胞。?
一種表達目標基因的方法，包括以下步驟：?
步驟A、將目標基因轉(zhuǎn)入綿羊β-酪蛋白基因，構(gòu)建含目標基因的綿羊β-酪蛋白基因表達載體；?
步驟B、根據(jù)綿羊β-酪蛋白基因啟動子靶序列設(shè)計TALE排列，并構(gòu)建表達TALE-TFs的表達載體；其中所述綿羊β-酪蛋白基因啟動子靶序列為SEQ?ID?NO.1中的28-48位，或靶序列為SEQ?ID?NO.1中的42-62位，或靶序列為SEQ?ID?NO.1中的56-76位；?
步驟C、用所述含目標基因的綿羊β-酪蛋白基因表達載體和所述表達TALE-TFs的表達載體共轉(zhuǎn)染綿羊成纖維細胞獲得轉(zhuǎn)染后的綿羊成纖維細胞。?
進一步，步驟B中所述表達TALE-TFs的表達載體包含SEQ?ID?NO.2堿基序列，或SEQ?ID?NO.3堿基序列，或SEQ?ID?NO.4堿基序列。?
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：為證實重組的表達框是否有效，國內(nèi)外均采用在乳腺上皮細胞中進行檢測。而利用TALE-TFs技術(shù)使不表達β-酪蛋白基因的綿羊成纖維細胞能夠表達β-酪蛋白基因，也就能夠?qū)崿F(xiàn)用TALE-TFs在綿羊成纖維細胞中激活重組的β-酪蛋白基因——外源整合基因表達框，能夠為體外檢測重組的β-酪蛋白啟動子驅(qū)動的表達框提供一種更加方便的檢測途徑，無需培養(yǎng)乳腺上皮細胞。?
附圖說明
此處所說明的附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，構(gòu)成本申請的一部分，本發(fā)明的示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當限定。在附圖中：?
圖1為綿羊β-酪蛋白基因結(jié)構(gòu)示意圖；?
圖2為pTY-ShE1LB-2BsmBI-ShE1RB載體結(jié)構(gòu)示意圖；?
圖3為pTY-ShE2LB-2BsmBI-ShE2RB載體結(jié)構(gòu)示意圖；?
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