[發(fā)明專利]一種葡萄籽中低聚原花青素的提取及檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310618192.8
• 申請(qǐng)日: 2013-11-29
• 公開（公告）號(hào): CN103601713A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 婁大偉;胡鳳;孫秀云;祝波;連麗麗;任紅;金麗;羅亞楠;楊巧玲;陳曉影
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林化工學(xué)院
• 主分類號(hào): C07D311/62
• 分類號(hào): C07D311/62;G01N30/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

?本發(fā)明涉及一種從天然產(chǎn)物中提取有效成分并檢測(cè)的工藝，特別是一種從葡萄籽中提取低聚原花青素及其檢測(cè)的方法，屬于分離純化原花青素技術(shù)領(lǐng)域。

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背景技術(shù)

原花青素（簡稱OPC）是一種多酚類化合物，廣泛存在于葡萄、藍(lán)莓、櫻桃、李子和松樹皮等植物中，其中葡萄籽是原花青素的重要來源。原花青素是一種天然的自由基清除劑和抗氧化劑，而且還有抗衰老，抗腫瘤，抗癌變，預(yù)防心腦血管疾病，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化，改善肌膚彈性、美白和防曬等功能，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于食品、藥品和化妝品等領(lǐng)域。在結(jié)構(gòu)上，原花青素是由不同數(shù)量的兒茶素（catechin）或表兒茶素（epicatechin）結(jié)合而成。最簡單的原花青素是兒茶素或表兒茶素或兒茶素與表兒茶素形成的二聚體，此外還有三聚體、四聚體等直至十聚體。按聚合度的大小，通常將二~五聚體稱為低聚體（簡稱OPC），將五聚體以上的稱為高聚體（簡稱PPC）。

目前，有關(guān)利用葡萄籽提取原花青素的方法主要有以下幾種：水提取法、傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取法、超臨界CO₂萃取法、微波提取法等，這些提取方法主要存在的不足是：水提取法選水作為提取劑，浸提時(shí)間長，溫度高，容易造成原花青素的損失，同時(shí)水的極性較大，溶出雜志比較多；傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取法的缺陷是有機(jī)溶劑消耗多，耗時(shí)長，生產(chǎn)成本高，得到的產(chǎn)品或多或少都存在溶劑的殘留；超臨界CO₂萃取法成本高，對(duì)操作條件的要求比較高；微波提取法一旦微波泄漏具有較高的危險(xiǎn)性，安全性較差。

原花青素含量的分析測(cè)定方法有很多，例如（鐵銨鹽）比色法、分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法等。在這些分析方法中比色法和分光光度法專屬性差，誤差大。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種利用索氏提取法和固相萃取法相結(jié)合的工藝提取葡萄籽中的低聚原花青素，并利用高效液相色譜對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)的方法。該方法首先是將葡萄籽進(jìn)行干燥、粉碎、過篩，脫脂得到葡萄籽粉末，再將葡萄籽粉末經(jīng)提取、過濾、濃縮，再溶解最后固相萃取得到精制原花青素，精制原花青素過微孔濾膜后進(jìn)入高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)。利用該方法可從葡萄籽中快速、簡單的提取得到含量大于65%?，收率可達(dá)3.2%?的低聚原花青素。具體步驟如下：

（1）將葡萄籽干燥后粉碎至60—80目后備用；

（2）將粉碎后的葡萄籽放入脂溶性溶劑中，采用索氏提取脫脂，其中葡萄籽與脂溶性溶劑重量、體積比（料液比）為1:30，提取溫度90℃，提取時(shí)間90?min，提取結(jié)束后繼續(xù)室溫浸泡10?h；得到脫脂葡萄籽粉末及淡黃色葡萄籽油；

（3）將脫脂后的葡萄籽粉末加入40%—80%乙醇水溶液中置于索氏提取器中提取，提取溫度120—160℃，提取時(shí)間20—60?min，料液比1:60—1:100，過濾；

（4）將濾液合并后減壓濃縮，得到原花青素粗提物；

（5）用蒸餾水或純凈水溶解粗提物，將粗提物置于固相萃取儀中進(jìn)行固相萃取，先用純水淋洗一次，再用20%甲醇淋洗一次，最后用純甲醇洗脫得到精制原花青素；

（6）將精制原花青素過0.45?μm有機(jī)相微孔濾膜，進(jìn)行高效液相色譜分析測(cè)定。

?上述脂溶性溶劑為石油醚（60—90沸程）。

?上述索氏提取器為全自動(dòng)索氏提取器，型號(hào)為SE-412。

?上述固相萃取儀為全自動(dòng)固相萃取儀，型號(hào)為F250。

本發(fā)明具有以下特點(diǎn)：索氏提取法是利用溶劑回流和虹吸原理，使原花青素連續(xù)不斷地被純?nèi)軇┹腿。裙?jié)約溶劑萃取效率又高；固相萃取法可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過程，操作簡單、省時(shí)省力；高效液相色譜分析速度快、檢測(cè)靈敏度高、分離效率高、操作自動(dòng)化、定量精度高、重復(fù)性好、應(yīng)用廣泛。本發(fā)明是環(huán)保型的提取工藝，在提取過程中所用的溶劑可以循環(huán)利用，溶劑用量小，且毒性很小，對(duì)環(huán)境的影響較低。

采用該方法提取及測(cè)定的低聚原花青素含量>?65%?，收率3.2%左右?。

附圖說明

圖1為本發(fā)明工藝流程圖。

圖2為精制原花青素樣品進(jìn)行高效液相色譜分析測(cè)定譜圖。圖中1—兒茶素；2—原花青素B₂；3—表兒茶素。

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具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

（1）將葡萄籽干燥后粉碎至60—80目后備用；