[發(fā)明專利]一種利用全細(xì)胞脂肪酸對沙門氏菌菌株的分類方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310618107.8
• 申請日: 2013-11-26
• 公開（公告）號: CN103589775A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張鵬飛;付騁宇;藍(lán)海嘯;劉德昊;王新
• 申請（專利權(quán)）人: 中華人民共和國陜西出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/42
• 代理公司: 西安智邦專利商標(biāo)代理有限公司 61211
• 代理人: 楊引雪

1.一種利用全細(xì)胞脂肪酸對沙門氏菌菌株的分類方法，其特征在于，包括以下步驟：

1】選取多株沙門氏菌菌株，并獲取多株沙門氏菌菌株的脂肪酸信息質(zhì)譜，其具體是步驟是：

1.1】將沙門氏菌菌株進(jìn)行培養(yǎng)獲得沙門氏菌菌株細(xì)胞；

1.2】分別對沙門氏菌菌株細(xì)胞進(jìn)行熱裂解處理，形成氣體產(chǎn)物；

1.3】將氣體產(chǎn)物注入氣相色譜柱的系統(tǒng)進(jìn)行處理，從而獲得沙門氏菌菌株脂肪酸的信息質(zhì)譜；

2】對獲得的每株沙門氏菌菌株脂肪酸的信息質(zhì)譜進(jìn)行譜庫檢索，確認(rèn)每株沙門氏菌菌株脂肪酸種類和脂肪酸的含量；

3】對上述步驟2】的結(jié)果采用最短距離法和歐氏距離法進(jìn)行聚類分析,并繪制出沙門氏菌菌株的脂肪酸系統(tǒng)樹狀圖譜；

4】將待測試的沙門氏菌菌株，根據(jù)上述步驟1】和步驟2】獲取菌株脂肪酸種類和脂肪酸的含量，將獲得的結(jié)果和步驟3】中所獲得的沙門氏菌菌株的脂肪酸系統(tǒng)樹狀圖譜進(jìn)行結(jié)合并繪制出新的沙門氏菌菌株的脂肪酸系統(tǒng)樹狀圖譜，從而確定待測沙門氏菌菌株的類型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所的利用全細(xì)胞脂肪酸對沙門氏菌菌株的分類方法，其特征在于：所述步驟1.1】將沙門氏菌菌株進(jìn)行培養(yǎng)獲得沙門氏菌菌株細(xì)胞；其具體步驟是：

1.1.1】沙門氏菌菌株預(yù)培養(yǎng)；

將沙門氏菌菌株接種于10mL的肉湯培養(yǎng)基中，保持溫度在37℃，并在1580rpm轉(zhuǎn)速的情況下震蕩培養(yǎng)18-24h；

1.1.2】沙門氏菌菌株進(jìn)行二次培養(yǎng)；

提取上述步驟1.1.1】預(yù)培養(yǎng)菌液1mL并接種到100肉湯培養(yǎng)基中，在恒溫?fù)u床上，37℃恒溫震蕩培養(yǎng)18-24h。

1.1.3】將0.5%的甲醛注入步驟1.1.2】的培養(yǎng)菌液中進(jìn)行滅活處理；

1.1.4】將滅活處理后的培養(yǎng)液在轉(zhuǎn)速4000r/min的情況下離心處理2min，收集沙門氏菌菌株細(xì)胞；

1.1.5】用滅菌蒸餾水對收集的沙門氏菌菌株細(xì)胞進(jìn)行至少兩次洗滌，然后使用無菌純凈水對收集的沙門氏菌菌株細(xì)胞進(jìn)行預(yù)懸浮，最后將細(xì)胞移到容量瓶內(nèi)冷凍干燥后保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所的利用全細(xì)胞脂肪酸對沙門氏菌菌株的分類方法，其特征在于：所述步驟1.2】通過熱裂解儀分別對沙門氏菌菌株細(xì)胞進(jìn)行處理，從而形成氣體產(chǎn)物；其具體是：使用熱裂解儀在600℃的溫度下進(jìn)行裂解處理12s，噴射溫度保持在280℃，從而形成氣體產(chǎn)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所的利用全細(xì)胞脂肪酸對沙門氏菌菌株的分類方法，其特征在于：所述步驟1.3】將氣體產(chǎn)物注入氣相色譜柱的系統(tǒng)進(jìn)行處理，從而獲得沙門氏菌菌株脂肪酸的信息質(zhì)譜；其具體步驟是：

1.3.1】設(shè)定氣相色譜柱的系統(tǒng)內(nèi)的初始溫度為45℃，進(jìn)樣口溫度為250℃，載氣為氦氣，流速36.5cm/s，分流比為30:1，離子源溫度220℃，接口溫度250℃，光譜掃描范圍20–600U；

1.3.2】將氣體產(chǎn)物注入到設(shè)定氣相色譜柱的系統(tǒng)內(nèi)，按照逐漸升溫的方式加熱。

1.3.3】對氣體產(chǎn)物離子全掃描，獲取氣體產(chǎn)物中脂肪酸的信息質(zhì)譜。