[發(fā)明專利]一種基因敲入重組載體及其制備方法和小鼠模型制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310617760.2
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN103642828A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈月雷
• 申請（專利權(quán)）人: 北京百奧賽圖基因生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12Q1/66;A01K67/027
• 代理公司: 北京市百倫律師事務(wù)所 11433
• 代理人: 周紅力;姜瑩

1.一種用于基因敲入的重組載體，其特征在于，所述重組載體包含DNA片段結(jié)構(gòu)IL17A-IRES-luc；

其中，IL17A為白細(xì)胞介素17A的編碼基因，IRES為內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)，luc為分泌型熒光素酶的編碼基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組載體，其中，所述重組載體是將DNA片段結(jié)構(gòu)IRES-luc導(dǎo)入表達(dá)載體pIL17A-GFP得到的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的重組載體，其中，所述分泌型熒光素酶選自由Gaussia熒光素酶、Gaussia-Dura熒光素酶、Cypridina熒光素酶、Green?Renilla熒光素酶和Red?Firefly熒光素酶所組成的組。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組載體，其中，所述分泌型熒光素酶為Gaussia熒光素酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的重組載體，其中，所述表達(dá)載體pIL17A-GFP從5’末端至3’末端的結(jié)構(gòu)包括：5’端IL17A基因的同源臂序列，轉(zhuǎn)錄終止序列SV40?polyA，5’端Cre酶識別位點(diǎn)LoxP，PGK啟動子序列，新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶編碼序列Neo，轉(zhuǎn)錄終止序列polyA，3’端Cre酶識別位點(diǎn)LoxP，3’端IL17A基因的同源臂序列，負(fù)篩選標(biāo)記基因的編碼核苷酸序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組載體，其中，所述DNA片段結(jié)構(gòu)IRES-luc導(dǎo)入表達(dá)載體pIL17A-GFP的位點(diǎn)位于5’端IL17A基因的同源臂序列和轉(zhuǎn)錄終止序列SV40?polyA元件之間。

7.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4或6所述的重組載體，其中，所述重組載體具有SEQ?ID?NO：1所示的堿基序列。

8.權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的重組載體的制備方法，其中，該方法包括將DNA片段結(jié)構(gòu)IRES-luc導(dǎo)入表達(dá)載體pIL17A-GFP中。

9.一種小鼠模型制備方法，該方法包括將權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的重組載體轉(zhuǎn)染進(jìn)C57BL/6胚胎干細(xì)胞中并篩選獲得陽性重組胚胎干細(xì)胞，用所述陽性重組胚胎干細(xì)胞獲得F1代雜合子小鼠，使雌雄F1代雜合子小鼠交配獲得F2代小鼠，并在F2代小鼠中篩選出攜帶有所述重組載體的純合子IL17A-luc模型小鼠。

10.一種檢測根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法制備獲得的小鼠模型中IL17A基因表達(dá)情況的方法，該方法包括對小鼠模型的血液和/或尿液中分泌型熒光素酶的含量進(jìn)行檢測。

11.一種IL17A-luc模型小鼠在與IL17A基因表達(dá)相關(guān)的研究中的應(yīng)用。

12.一種IL17A-luc模型小鼠在篩選可誘導(dǎo)IL17A基因表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。

13.一種IL17A-luc模型小鼠在篩選可抑制IL17A基因表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。