[發明專利]一種牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因檢測的引物組合物及其試劑盒和應用

有效

• 申請號: 201310617444.5
• 申請日: 2013-11-29
• 公開（公告）號: CN103627804A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 郭霄峰;代元元;吳曉薇
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

1.一種牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因檢測的引物組合物，其特征在于，由引物組A和引物組B組成；所述引物組A由引物1和引物2組成；所述引物組B由引物3和引物4組成；引物1～4的核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1～4所示。

2.根據權利要求1所述牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因檢測的引物組合物，其特征在于，所述牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因是尿苷酸合酶基因編碼精氨酸的405處密碼子發生無義突變的基因。

3.根據權利要求1所述牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因檢測的引物組合物，其特征在于，引物1和引物2的摩爾比為1∶1；引物3和引物4的摩爾比為1∶1。

4.權利要求1～3所述牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因檢測的引物組合物在巢式PCR法檢測牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因方面的應用。

5.一種含有權利要求1～3任一所述牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因檢測的引物組合物的試劑盒。

6.根據權利要求5所述試劑盒，其特征在于，包含有如下組分：權利要求1～3任一所述牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因檢測的引物組合物、DNA聚合酶、PCR反應緩沖液、dNTP和滅菌水。

7.權利要求5所述試劑盒在檢測牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因方面的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，檢測方法是利用巢式PCR方法進行兩次PCR反應，第一次PCR反應的模板為牛血液中的全組DNA，引物為引物組A；第二次PCR反應的模板為第一次PCR反應產物的稀釋液，引物為引物組B；對PCR產物進行測序，根據測序結果判定是否為牛尿苷酸合酶缺乏癥有害基因。

9.根據權利8所述應用，其特征在于，第一次PCR反應擴增得到一個419bp的片段，如SEQ?ID?NO.5所示；第二次PCR反應擴增得到一個180bp的片段，如SEQ?ID?NO.6所示；所述判定的方法為根據測序圖查看所述尿苷酸合酶缺乏癥有害基因是尿苷酸合酶基因編碼精氨酸的405處密碼子是否發生無義突變來判斷，如果測序圖中該位點為單峰C，則為非尿苷酸合酶缺乏癥有害基因；該位點為雙峰，同時含有C和T，則為尿苷酸合酶缺乏癥有害基因。

10.根據權利8或9所述應用，其特征在于，所述第一次PCR反應的擴增體系中各組分的比例為模板∶引物1∶引物2∶PCR反應緩沖液∶dNTP∶DNA聚合酶∶滅菌水=2∶2∶10∶10∶1∶73；

所述第二次PCR反應的擴增體系中各組分的比例為模板∶引物3∶引物4∶PCR反應緩沖液∶dNTP∶DNA聚合酶∶滅菌水=2∶2∶10∶10∶1∶73。