[發(fā)明專利]清香桂總生物堿及其制備方法和用途

在審

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• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN104666374A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發(fā)明（設計）人: 俞培忠;程科軍;石智;胡昌奇
• 申請（專利權）人: 復旦大學;麗水市農(nóng)業(yè)科學研究院;暨南大學
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P35/00;A61K125/00
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發(fā)明屬藥物領域，涉及清香桂總生物堿及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的用途。

背景技術

本領域知悉，惡性腫瘤仍然是目前危害人們健康的重大疾病之一，目前，腫瘤的治療方案通常采用手術、放療和化療手段，其中化療作為腫瘤治療的三大傳統(tǒng)手段之一，在腫瘤治療中占據(jù)著重要地位。而從天然藥物中尋找發(fā)現(xiàn)活性成分也一直是抗腫瘤藥物研究的熱點。

中藥材黃楊科野扇花屬植物清香桂(Sarcococca?ruscifolia?Stapf)富含生物堿成分，該植物是我國民間藥物，主要用于治療胃病、跌打勞傷、頭暈心悸、喉嚨腫痛等。多年來，國內(nèi)外對相關甾體生物堿的活性研究多集中在乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶活性抑制方面。迄今，尚未見有關清香桂生物堿部位對多種腫瘤細胞具有非常好的抑制活性的報道。

本申請的發(fā)明人，擬通過抗腫瘤天然產(chǎn)物篩選中，提供清香桂生物堿部位及其制備方法和對抗腫瘤活性的用途。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種清香桂總生物堿。

本發(fā)明的進一步目的是提供所述清香桂總生物堿的制備方法。

本發(fā)明的更進一步目的是提供所述清香桂總生物堿在制備抗腫瘤藥物中的用途。

本發(fā)明通過抗腫瘤天然產(chǎn)物篩選，經(jīng)提取分離的方法從黃楊科野扇花屬植物清香桂的生物堿部位分離制得清香桂總生物堿，進一步通過實驗證實，所述的香桂總生物堿對多種腫瘤細胞具有顯著的抑制活性。

本發(fā)明提供了所述清香桂總生物堿的制備方法，所述的清香桂總生物堿可以采用酸水、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等有機溶劑進行提取獲得，并經(jīng)加熱、回流或超聲、微波輔助提取。

本發(fā)明的一個實施例中，采用乙醇提取及分離獲得清香桂總生物堿：

清香桂(Sarcococca?ruscifolia?Stapf)根莖粉碎用95%乙醇分3次加熱回流，合并濾液，減壓濃縮至浸膏，懸浮于鹽酸水溶液后用石油醚萃取，除去脂溶性雜質(zhì)，酸水層用NaOH調(diào)節(jié)pH，再用氯仿萃取，氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，得含生物堿部位，收率為1.5%。

本發(fā)明的另一個實施例中采用酸水提取及分離獲得清香桂總生物堿：

清香桂(Sarcococca?ruscifolia?Stapf)根莖粉碎用5%鹽酸水溶液分3次超聲提取，每次半小時，合并濾液，并用石油醚萃取，除去脂溶性雜質(zhì)，酸水層用NaOH調(diào)節(jié)pH，再用氯仿萃取，氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，得含生物堿部位，收率為1.2%。

本發(fā)明的另一個實施例中采用氯仿，酸水提取及分離獲得清香桂總生物堿：

清香桂(Sarcococca?ruscifolia?Stapf)根莖粉碎用氯仿分3次加熱回流，合并濾液，減壓濃縮至干，2%的鹽酸水溶液懸浮后，用石油醚萃取，除去脂溶性雜質(zhì)，酸水層用NaOH調(diào)節(jié)pH至，再用氯仿萃取，氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，得含生物堿部位，收率為1.0%。

進一步，本發(fā)明采用萃取或色譜方法制備和純化清香桂總生物堿。

本發(fā)明制得的清香桂總生物堿進行了抗腫瘤活性試驗，其中分別對人胃癌細胞株AGS、MGC-803，人肺癌細胞株A549、H1299，人結(jié)直腸癌細胞株HCT116、HT29、SW480、SW620，人膠質(zhì)母細胞瘤細胞株U87、U251和人乳腺癌細胞株MCF-7、BT-549進行不同濃度的抑制試驗，結(jié)果顯示，所述的香桂總生物堿對多種腫瘤細胞包括AGS、MGC-803、A549、H1299、HCT116、HT29、SW480、SW620、U87、U251、MCF-7、BT-549等腫瘤細胞具有顯著的抑制活性，所述的清香桂總生物堿可進一步制備制備抗腫瘤藥物，用于但不局限于治療胃癌、肺癌、結(jié)直腸癌、腦癌及乳腺癌等。

更進一步的，所述藥物可用載體或賦形劑給予全身或局部給藥，或，經(jīng)鼻、經(jīng)口、透皮、非腸道、靜脈或肌肉注射給藥。

具體實施方式

實施例1提取及分離清香桂總生物堿的乙醇：

清香桂(Sarcococca?ruscifolia?Stapf)根莖粉碎(10.0g)用95%乙醇300ml分3次加熱回流，合并濾液，減壓濃縮至浸膏，懸浮于2%的鹽酸水溶液后用石油醚萃取，除去脂溶性雜質(zhì)，酸水層用NaOH調(diào)節(jié)pH至～10，再用氯仿萃取。氯仿層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，得含生物堿部位0.15g，收率為1.5%。

實施例2提取及分離清香桂總生物堿的酸水：