[發(fā)明專利]新霉素、泰樂菌素二合一金標(biāo)微孔試紙條

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310617093.8
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN104678102A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李向梅;吳小平;王世恩;王照鵬;溫凱;王文珺;許舒婷;李寧
• 申請（專利權(quán)）人: 北京維德維康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全檢測領(lǐng)域，具體涉及一種同時檢測動物源性食品（如牛奶等）中新霉素、泰樂菌素殘留量的新霉素、泰樂菌素二合一金標(biāo)微孔試紙條。

背景技術(shù)

新霉素(neomycin，NEO)，屬于氨基糖苷類抗生素，是由新霉胺和新霉二糖胺結(jié)合而成。其中新霉胺是由D-葡萄糖二胺與脫氧鏈霉胺結(jié)合而成，新霉二糖胺是由D-核糖與新霉糖胺結(jié)合而成。新霉素是兩個立體異構(gòu)體新霉素B和新霉素C的混合物，其中以新霉素B為重要成分，臨床上多用新霉素的硫酸鹽。新霉素是重要的抗感染藥物，抗菌譜廣，對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和結(jié)核桿菌均有良好的抑制作用。在獸醫(yī)臨床上，新霉素是治療畜禽細(xì)菌性腸炎的首選藥物之一，另外，新霉素還被普遍用于治療乳腺炎、角膜炎、結(jié)膜炎、耳炎、皮炎、外傷感染、足腐爛等疾病。但是由于其對人和動物存在潛在的耳毒性和腎毒，所以對食品中新霉素殘留進(jìn)行檢測十分必要。我國農(nóng)業(yè)部235號公告規(guī)定的新霉素最高殘留限量為：牛奶、羊奶500μg/kg，雞蛋500μg/kg，牛、羊、豬、雞、火雞、鴨的肌肉、脂肪、肝500μg/kg，牛、羊、豬、雞、火雞、鴨的腎10000μg/kg。歐盟制定的動物性食品中新霉素最高殘留限量規(guī)定肌肉、肝臟、脂肪和雞蛋為500μg/kg，腎臟為5000μg/kg，牛奶為1500μg/kg。

泰樂菌素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、類菌介質(zhì)和某些病毒有抑制作用，尤其對禽敗血支原體、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌極其有效，主要通過抑制細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成而發(fā)揮作用。作為獸用抗生素藥，泰樂菌素主要廣泛用作飼料添加劑和動物治療，促進(jìn)禽畜生長，提高飼料的利用率。但是當(dāng)泰樂菌素在體內(nèi)蓄積達(dá)到一定的濃度，可造成前庭和耳蝸神經(jīng)的損害，導(dǎo)致眩暈和聽力減退，嚴(yán)重者可造成肝、腎及其造血系統(tǒng)的嚴(yán)重?fù)p。1999年，歐盟已禁止將泰樂菌素作為飼料添加劑使用，從2006年1月1日起，歐盟成員國全面禁止使用抗生素做為促生長劑。我國農(nóng)業(yè)部第235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定，泰樂菌素在畜禽肌肉組織中最大殘留限量為200μg/kg。歐盟還規(guī)定在豬的肝、腎，家禽的肌肉、皮及脂肪、肝、腎中均不得檢出泰樂菌素，美國食品和藥品管理局（FDA）規(guī)定，泰樂菌素在可食組織和蛋中的殘留允許濃度為0.2mg/kg，在乳中為0.05mg/kg，日本規(guī)定在肌肉、豬肉、牛肉中允許的殘留量是0.05mg/kg。

國內(nèi)外報道的檢測新霉素和泰樂菌素的方法，主要有高效液相色譜法（HPLC）、液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS），是檢測抗生素最常用的方法，但是在實(shí)際操作中需要LC-UV、LC-MS及LC-MS/MS等高檔儀器，且處理復(fù)雜、繁瑣、操作時間長、操作技術(shù)要求高。目前尚無可同時檢測新霉素和泰樂菌素的殘留量的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新霉素、泰樂菌素二合一金標(biāo)微孔試紙條。

本發(fā)明提供了一種用于檢測新霉素和泰樂菌素的試劑盒，包括至少具有一個樣品槽的樣品板和至少一個試紙條；

所述樣品槽的底部附著有新霉素特異性抗體的膠體金標(biāo)記物和泰樂菌素特異性抗體的膠體金標(biāo)記物；

所述試紙條包括底板1、反應(yīng)膜2、樣品吸收墊3和吸水墊4；所述樣品吸收墊、所述反應(yīng)膜和所述吸水墊依次附著于所述底板上，所述樣品吸收墊的末端與所述反應(yīng)膜的始端相連，所述反應(yīng)膜的末端與所述吸水墊的始端相連；所述反應(yīng)膜上由始端至末端依次具有T₂線、T₁線和C線，所述T₂線、T₁線和C線均與所述反應(yīng)膜的軸線垂直；所述T₂線和T₁線上分別包被如下兩種偶聯(lián)物：泰樂菌素-載體蛋白偶聯(lián)物、新霉素-載體蛋白偶聯(lián)物；所述C線上包被可與新霉素特異性抗體和/或泰樂菌素特異性抗體結(jié)合的抗抗體。

所述新霉素特異性抗體可為新霉素單克隆抗體或新霉素多克隆抗體。所述泰樂菌素特異性抗體可為泰樂菌素單克隆抗體或泰樂菌素多克隆抗體。所述新霉素單克隆抗體具體可為新霉素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株NEO-5E9CGMCC?No.8410分泌的單克隆抗體。所述泰樂菌素單克隆抗體具體可為泰樂菌素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株TYL-5D6CGMCC?No.8409分泌的單克隆抗體。

以上任一所述的載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵白蛋白或人血清白蛋白。

所述新霉素-載體蛋白偶聯(lián)物中，所述載體蛋白具體可為BSA，新霉素與BSA的摩爾結(jié)合比具體可為6:1。