[發明專利]草莓鑲脈病毒的快速檢測試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201310613488.0
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN103667525A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 尚巧霞;陳柳;陳笑瑜;邢冬梅;魏艷敏;劉正坪;趙曉燕;冉策;楊建強;胡學軍;陳明遠;祝寧;韓成貴
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;王慧鳳

1.檢測草莓鑲脈病毒（Strawberry?vein?banding?virus）的專用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成。

2.一種檢測草莓鑲脈病毒（Strawberry?vein?banding?virus）的試劑盒，包括權利要求1所述的專用引物。

3.權利要求1所述專用引物在制備檢測草莓鑲脈病毒（Strawberry?vein?banding?virus）的試劑盒中的應用。

4.權利要求1所述專用引物或權利要求2所述試劑盒在鑒定草莓鑲脈病毒（Strawberry?vein?banding?virus）病毒病中的應用。

5.一種檢測草莓鑲脈病毒（Strawberry?vein?banding?virus）或檢測草莓鑲脈病毒（Strawberry?vein?banding?virus）病毒病感染的方法，包括如下步驟：

（1）提取待測生物樣本的基因組DNA；

（2）以步驟（1）的基因組DNA為模板，用權利要求1所述的專用引物進行環介導恒溫擴增；

（3）根據步驟（2）的擴增產物鑒定所述待測生物樣本是否含有草莓鑲脈病毒或者是否感染草莓鑲脈病毒病毒病。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述環介導恒溫擴增的反應程序為：63℃1小時，80℃10分鐘。

7.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述環介導恒溫擴增的反應體系中，序列表的序列1所示DNA和序列表的序列4所示DNA的濃度均為1.2μM，序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA的濃度均為0.1μM。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述環介導恒溫擴增的體系包括：1.2μM序列表的序列1所示DNA，1.2μM列表的序列4所示DNA，0.1μM序列表的序列2所示DNA，0.1μM序列表的序列3所示DNA，10×Bst?buffer2.5ul，2mM?MgSO₄，1.6mM?dNTPs，1M?Betaine，8U?Bst?DNA?polymerase，DEPC?ddH₂O，待測生物樣本的基因組DNA,擴增體系總體積為25μl。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述環介導恒溫擴增產物的檢測方法為下述1）或2）所述的方法：

1）擴增產物中加入0.1μl熒光染料SYBR?green?I，直接觀察，染有草莓鑲脈病毒的樣本有沉淀物呈現黃綠色，無草莓鑲脈病毒侵染的樣本透明且呈橘紅色；

2）常規電泳和紫外成像方法：取5μl擴增產物加入5μlH₂O進行1%瓊脂糖凝膠電泳，通過紫外成像技術能夠顯示感染有草莓鑲脈病毒的樣本形成瀑布型條帶。