[發明專利]一種能夠抑制土傳病害的秸稈腐熟劑的制備方法

有效

• 申請號: 201310612137.8
• 申請日: 2013-11-28
• 公開（公告）號: CN103642782A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 吳昊;梁曉輝;陳立華;管永祥;梁永紅;邵孝侯;薛平
• 申請（專利權）人: 南京寧糧生物工程有限公司
• 主分類號: C12N11/02
• 分類號: C12N11/02;A01P3/00;C05F17/00;C05F11/08;C12R1/125;C12R1/07;C12R1/69;C12R1/66
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1.一種抑制土傳病害秸稈腐熟劑的制備方法，包括如下步驟：

步驟一，構巢曲霉固體吸附菌劑的制備，

首先制備PDA培養液，以配制1L培養基計，用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min，用紗布過濾后，濾液加20g普通蔗糖，定容至1000ml，121℃滅菌20min既得；

將構巢曲霉接種到PDA培養液中，進行液體發酵生產，其發酵生產的條件為：初始pH自然，培養溫度為25℃，溶氧，所述溶氧的通氣量范圍為30～100％，170rpm，發酵中后期形成菌絲片段，發酵液菌株的菌落形成單位≥1×10⁷cfu?ml^-1；構巢曲霉的發酵液按照40％(v：w)加入麥麩，最后采用真空干燥機干燥至含水量低于5％，粉碎機粉碎成菌種粉，制得構巢曲霉固體吸附菌劑，低溫保存備用；

步驟二，米曲霉固體吸附菌劑的制備，

首先PDA培養液配制，以配制1L培養基計，用200g土豆削皮后切成小塊放到水里煮，沸騰后煮30min，用紗布過濾后，濾液加20g普通蔗糖，定容至1000ml，121℃滅菌20min，既得；

將米曲霉接種到PDA培養液中，進行液體發酵生產，其發酵生產的條件為：培養溫度28℃，溶氧，所述溶氧的通氣量范圍為40～90％，120-180rpm，發酵中后期形成菌絲片段，發酵液菌株的菌落形成單位≥1×10⁷cfu?ml^-1；米曲霉發酵液按照40％(v：w)加入麥麩，真空干燥機干燥至含水量低于5％，粉碎機粉碎成菌種粉，制得米曲霉固體吸附菌劑，低溫保存備用；

步驟三，枯草芽孢桿菌固體吸附菌劑的制備

首先液體種子培養基和液體發酵培養基，所述液體種子培養基和液體發酵培養基為相同的培養基，均采用牛肉膏蛋白胨培養基，配方為，以配置1L培養基計：采用牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl10g，自來水1000ml，混合，121℃滅菌20min既得；

將枯草芽孢桿菌接種到液體種子培養基培養，所述的培養條件為：培養溫度37℃，搖床轉速150rpm，培養時間24小時，種子含菌量大于1×10⁹cfu?ml^-1，制得種子；

將種子按照5％比例接種到液體發酵培養基進行液體發酵生產，其發酵生產的條件為：初始pH范圍為7.0～7.5，培養溫度28～37℃，溶氧通氣量范圍為30～100％，150-220rpm，發酵后期發酵液該菌株的菌落形成單位≥1×10⁹cfu?ml^-1；枯草芽孢桿菌發酵液按照50％(v：w)加入麥麩，真空干燥機干燥至含水量低于5％，粉碎機粉碎成菌種粉，制得枯草芽孢桿菌固體吸附菌劑，低溫保存備用；

步驟四，酵母菌固體吸附菌劑的制備

首先液體的種子培養基和發酵培養基采用豆芽汁培養基為相同的培養基，其配方為，以1L培養基計：稱新鮮黃豆芽100g，葡萄糖35g，加入1000ml水，混合后煮沸30min，紗布過濾，濾液加35g葡萄糖，115℃滅菌30min，既得；

將酵母菌接種到豆芽汁種子培養基培養，培養條件為：培養溫度30℃，搖床轉速130～160rpm，培養時間36小時，種子含菌量大于1×10⁸cfu?ml^-1，種子按照8％比例接種到發酵罐進行液體發酵生產，其發酵生產的條件為：初始pH自然，培養溫度28～32℃，溶氧通氣量范圍為30～100％，120～190rpm，發酵液該菌株的菌落形成單位≥1×10⁸cfu?ml^-1，發酵液濃度變稠；酵母菌發酵液按照40％(v：w)加入麥麩，真空干燥機干燥至含水量低于5％，粉碎機粉碎成菌種粉，制得酵母菌固體吸附菌劑，低溫保存備用；

步驟五，短小芽孢桿菌固體吸附菌劑的制備

首先液體種子培養基和發酵培養基，所述發酵培養基采用牛肉膏蛋白胨培養基為相同的培養基，其配方為，以1L培養基計：將牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl10g和自來水1000ml混合，于121℃滅菌20min既得；

將短小芽孢桿菌接種到液體種子培養基培養，培養條件為：培養溫度37℃，搖床轉速130～160rpm，培養時間24小時，種子含菌量大于1×10⁹cfu?ml^-1，種子按照7％比例接種到發酵罐進行液體發酵生產，其發酵生產的條件為：初始pH范圍為7.0～7.5，培養溫度28～35℃，溶氧通氣量范圍為30～100％，120～160rpm，發酵后期部分菌株形成芽孢，發酵液該菌株的菌落形成單位≥1×10⁹cfu?ml^-1，發酵液濃度變稠；短小芽孢桿菌發酵液按照40％(v：w)加入麥麩，真空干燥機干燥至含水量低于5％，粉碎機粉碎成菌種粉，短小芽孢桿菌固體吸附菌劑，低溫保存備用；

步驟六

將構巢曲霉固體吸附菌劑、米曲霉固體吸附菌劑、枯草芽孢桿菌固體吸附菌劑、酵母菌固體吸附菌劑和短小芽孢桿菌固體吸附菌劑按照質量比1：1.5：1：1.5：2在無菌條件下復合攪拌，在無菌條件下包裝，成品即為一種能夠抑制土傳病害的秸稈腐熟劑。