[發明專利]一種修復土壤生態系統的微生物修復劑

有效

• 申請號: 201310607191.3
• 申請日: 2013-11-27
• 公開（公告）號: CN103627658A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 高宇
• 申請（專利權）人: 安徽遠大機械制造有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/18;C12N11/14;B09C1/10;C12R1/11;C12R1/10;C12R1/145;C12R1/465;C12R1/865;C12R1/25
• 代理公司: 安徽省蚌埠博源專利商標事務所 34113
• 代理人: 倪波

技術領域

本發明屬于土壤生態系統修復領域，特別是一種用于土壤生態系統修復的微生物土壤修復劑及其制備方法，以及該微生物土壤修復劑在修復土壤中的應用。

背景技術

隨著工農業發展，土壤資源承受了越來越大的壓力，由于大量化肥、農藥的使用及重金屬污染，放射性污染使得土壤中難降解的有機物日益增多，從而導致土壤微生物種類和數量減少、土壤結構及生態系統破壞、農作物品質下降、病蟲害增加，土壤生態系統被破壞。

發明內容

本發明的目的在于提供一種修復土壤生態系統的微生物修復劑；

本發明另一目的是提供一種制備修復土壤生態系統的微生物修復劑的方法；本發明再一目的是將上述的微生物修復劑應用于土壤修復，促進作物生長。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的，一種修復土壤生態系統的微生物修復劑，其特征在于，以巨大芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、丁酸梭菌和酵母菌作為主體菌，以乳酸菌、細黃鏈霉菌作為輔助菌，將發酵完成的各菌種按照以下活菌數比例混合均勻得到液體微生物修復劑，巨大芽孢桿菌50-60，地衣芽孢桿菌40-50，丁酸梭菌30-50，酵母菌20-50，乳酸菌1-2，細黃鏈霉菌1，混合菌液中的有效活菌數≥3億/毫升。

進一步地，所述液體微生物修復劑與固體吸附物按照1升：5～10千克的體積重量比混合均勻后即得固體微生物修復劑。

進一步地，所述固體吸附物為草炭土和蛭石的混和物，經粉碎、高溫消毒后制得。

進一步地，所述主體菌的有效活菌數≥3億/毫升；所述輔助菌的有效活菌數≥1000萬/毫升。

一種制備上述修復土壤生態系統的微生物修復劑的方法，包括以下步驟：

（1）分別用固體培養基復蘇巨大芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、丁酸梭菌、酵母菌、乳酸菌和細黃鏈霉菌，并挑選出單克隆菌落；

（2）將挑選出的巨大芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、丁酸梭菌、酵母菌、乳酸菌和細黃鏈霉菌的單克隆菌落分別接種在一級液體培養基中，獲得液體菌種；

（3）分別將巨大芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、丁酸梭菌、酵母菌、乳酸菌和細黃鏈霉菌的液體菌種在二級培養培養基中，放大培養；

（4）分別將巨大芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、丁酸梭菌、酵母菌、乳酸菌和細黃鏈霉菌經放大培養的菌液接種到發酵罐中發酵培養，得到生產用菌液；

（5）將生產用菌液按照活菌數比例配比，混合均勻得到液體微生物修復劑；

（6）草炭土和蛭石粉碎，經高溫滅菌，冷卻至室溫后，將上述液體微生物修復劑噴灑在其上，充分吸收混合均勻后即得到固體微生物修復菌劑。

上述修復土壤生態系統的微生物修復劑在修復土壤中的應用，包括用于作物種植前基施或/和作物種植后追施。

上述微生物修復劑中各種微生物發酵液均可以按照常規方法制備，將購買到的菌種接種到固體培養基上進行復蘇培養，菌體生長后，挑取單克隆；將單克隆接種到小量液體培養基中培養（一級培養），得到液體菌種；將液體菌種接種到中量液體培養基中進行放大培養（二級培養）；放大培養后的菌種在接種到發酵罐中發酵培養，最終得到所要菌種的液體菌劑。對于該發明中涉及到的微生物，可以參考以下的方法制備：

下述的各種配方均為菌體液體培養基配方，固體培養基是在一級液體培養基的基礎上加入2%瓊脂。具體就是在一級液體培養基中加入2%的瓊脂，加熱至100℃溶解，40℃下冷卻并凝固，使其成為固體狀態即為固體培養基。所有的培養基均在120oC高溫高壓滅菌處理30分鐘。

（一）巨大芽孢桿菌?（Bacillus?megaterium，ATCC?14581，ATCC編號為美國典型培養物保藏中心編號）：

（1）復蘇活化、挑取單克隆：將購買的菌種接種到固體培養上，37℃靜置培養24小時。固體培養的配方是瓊脂2%，牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，氯化鈉0.2%，葡萄糖0.5%，用蒸餾水溶解，用水補足至100%，調節pH值為7.0。將上述混合物，在120℃高溫高壓滅菌處理30分鐘，40℃下冷卻并凝固。

（2）一級培養，得到液體菌種：將單克隆菌落接種到一級液體培養基中，37℃搖床培養，轉速為200轉/分鐘，過夜培養后得到液體菌種。其中一級液體培養基配方為牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，氯化鈉0.2%，葡萄糖0.5%，用蒸餾水溶解，用水補足至100%，調節pH值為7.0。培養基在120oC高溫高壓滅菌處理30分鐘。