[發明專利]一步快速和監控腫瘤的免疫檢測條

在審

• 申請號: 201310606257.7
• 申請日: 2013-11-26
• 公開（公告）號: CN103604925A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 惟釗·盧;詹姆斯·儆翊·盧;胡成龍
• 申請（專利權）人: 盧氏實驗室公司;南京路始生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

技術領域

本發明涉及一種一步快速和監控腫瘤的免疫檢測條，屬于生物診斷技術領域。

背景技術

根據流行病統計，毎70名婦女中有一人患卵巢腫瘤。患者存活率為30%。乳房腫瘤每年有數十萬以上患者。而腸胃道腫瘤患者比例更高。目前，篩檢測方法如下；卵巢腫瘤CA-125酶聯法，乳房腫瘤CA-15-3酶聯法，腸胃道腫瘤CA-199酶聯法。篩檢陽性者再以昂貴的方法做CT或MRI確診。腫瘤指標的提升顯示腫瘤發生或擴大；腫瘤指標的下降提示治療的成功。

CA-125、CA-15-3、CA-199酶聯法分別作為卵巢腫瘤、乳房腫瘤和腸胃道腫瘤的診斷和監控在美國和一些國家作為經典立法已經有若干年。但是尚沒有一步法快速診斷和監控的報道。現有的酶聯法具有如下不足之處：1）檢測時間長，酶聯法需要3小時出結果；2）保存時間短，保存要求高。需冰箱保存，而且只有6個月-12個月有效期。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足之處，提供一種一步快速和監控腫瘤的免疫檢測條。

本發明是通過檢測血液中與腫瘤相關的指標進行一步快速和監控腫瘤，與腫瘤相關的指標包括卵巢腫瘤CA-125、乳房腫瘤CA-15-3和腸胃道腫瘤CA-199。

本發明的免疫檢測條共分6個區，第一區加樣墊，第二區固相化標記抗體，第三區檢測區T，為包被抗體噴涂區帶，T區固相化與第二區抗體相對應的特異性抗體，第四區對照區C，C區固相化非特異性抗體，第五區吸水區，所述的吸水區為紙纖維片，第六區硝基纖維層析膜。T區的顏色深淺與待測抗原含量成正比，用檢測定量儀掃描或照相T區顏色，再以軟件可以測出待測抗原濃度范圍。所述的待測物質為與腫瘤相關的抗原，包括用于檢測卵巢腫瘤的CA-125、用于檢測乳房腫瘤的CA-15-3或用于檢測腸胃道腫瘤的CA-199。

所述的固相化標記抗體區的標記為可見顆粒標記抗體，如金標、硒標或碳標。

所述的對照區C區為硝基纖維素膜上包被兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG。

當檢測條用于檢測卵巢腫瘤的CA-125時，所述的第二區固相化標記抗體為固相化標記抗CA-125單克隆抗體，所述的檢測區T區固相化特異性抗體為包被抗體，與標記抗體相配對的抗CA-125單克隆抗體。

當檢測條用于檢測卵巢腫瘤的CA-15-3時，所述的第二區固相化標記抗體為固相化標記抗CA-15-3單克隆抗體，所述的檢測區T區固相化特異性抗體為包被抗體，與標記抗體相配對的抗CA-15-3單克隆抗體。

當檢測條用于檢測卵巢腫瘤的CA-199時，所述的第二區固相化標記抗體為固相化標記抗CA-199單克隆抗體，所述的檢測區T區固相化特異性抗體為包被抗體，與標記抗體相配對的抗CA-199單克隆抗體。

本發明的工作原理如下：待測樣滴加于第一區加樣墊，借或不借助展開劑上行至第二區固相化標記抗體區，血樣中如存在抗原CA-125或CA-15-3或CA-199，則與標記抗體形成“抗原-標記抗體”復合物。該復合物按毛細管原理在檢測條的第6區上上行，行至第3區檢測區，與T區一條固相包被線的另一特異抗體形成“標記抗體-抗原-固相包被抗體”復合沉淀線。該沉淀線的色帶深淺與抗原血樣中濃度有線性關系。上行至第4區對照區上，與C區的固相包被兔抗鼠IgG或羊抗鼠IgG相遇，因為單克隆抗體都屬于小鼠單克隆抗體，因此不管抗原存在與否，C區總會有一條沉淀線出現，此條色帶一般作為質量控制，如果C區色帶不出現，則說明檢測條失活。

在檢測時間15分鐘，將層析檢測盒放置于QKTECH4000金標定量分析儀中讀取結果。

檢測條的制備方法：

1、標記抗體的制備：將所需抗體加入所需量膠體金溶液，攪拌10分鐘后，加入1/10體積的1%小牛血清蛋白液作穩定劑，高速離心，取得玫瑰紅色沉淀物，即標記抗體。

2、將上述沉淀物溶解于緩沖劑（JAJInternationalInc,SanDiego,CA,USA產品）。中，鋪于玻璃紙上，真空抽干；

3、包被抗體制備：將與標記抗體相對應的另一抗體溶液用噴霧方法劃線于硝基纖維膜上，于37攝氏度烘干20分鐘；

4、裝配：將上述各組分貼在有膠面的塑料薄板上，上下兩端再貼上吸水紙。切割成條，再裝入塑殼之中。

免疫檢測條的腫瘤抗原配對抗體

經研發和制作，并用定量分析儀分析，本發明的腫瘤抗原配對抗體一步法研制結果匯總于表1。

表1腫瘤抗原配對抗體一步法研制結果