[發明專利]一種從乳豬皮中制備未變性天然膠原的方法

有效

• 申請號: 201310603757.5
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103601803A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 李國英;吳論文;劉文濤
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/30
• 代理公司: 成都科海專利事務有限責任公司 51202
• 代理人: 鄧繼軒

1.一種從乳豬皮中制備未變性天然膠原的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

（1）原料預處理

將新鮮乳豬皮100份，去除皮下脂肪，用料液比為1∶5-20（w/v），體積濃度為30%-60%單一脫脂劑處理24-48h，伴隨間歇性功率為50-200W超聲波每作用10-30min停5-20min，重復5-10次，中途換液3-5次，自來水沖洗，加入料液比為1∶1.5-4（w/v），體積濃度為0.5%-3%脫毛劑，保持溫度為25-45，℃轉動30-60min進行脫毛，然后將皮切碎，加入料液比為1∶10-40（w/v），濃度為0.05-0.5M/L非膠原蛋白去除劑，攪拌處理24-48h，中途換液3-5次，自來水沖洗，調節pH至7.5-9.0，再用料液比為1∶6-15（w/v），體積濃度為20-50%復合脫脂劑處理24-48h，伴隨間歇性功率為50-200W超聲波每作用10-30min停5-20min，重復5-10次，中途換液3-5次，蒸餾水浸洗，測定脂肪含量為0.3%～0.5%，產物作為膠原提取原料；

（2）未變性天然膠原的提取

將上述預處理所得的乳豬皮加入濃度為0.1-2M/L乙酸溶液和濃度為1wt%-5wt%提取劑，攪拌提取2-3天，獲得未變性乳豬皮膠原溶液；

（3）未變性天然膠原的純化

將上述未變性乳豬皮膠原溶液用8000-20000rpm高速離心機分離，除去濾渣，上清液中加入0.5-3M/L的NaCl鹽析，沉淀經離心后用0.05-1M/L的乙酸溶解，如此反復鹽析操作2-4次，再以濃度為0.1-1M/L的乙酸溶液為透析液透析處理2-3天，凍干，得到海綿狀乳豬皮膠原；

（4）以上步驟中除特殊說明外，均在溫度15℃以下進行。

2.如權利要求1所述從乳豬皮中制備未變性天然膠原的方法，其特征在于單一脫脂劑為AXAUT-50或AXAUT?AP，復合脫脂劑為AXAUT-50或AXAUT-AP中的任一種與異丙醇或丙酮中的任一種的組合。

3.如權利要求1所述從乳豬皮中制備未變性天然膠原的方法，其特征在于脫毛劑為蛋白酶Buzyme7703、蛋白酶Nowolase?NG或蛋白酶Basozyme?L10中的任一種。

4.如權利要求1所述從乳豬皮中制備未變性天然膠原的方法，其特征在于非膠原蛋白去除劑為磷酸鹽緩沖液、脫氧膽酸鈉或牛磺膽酸鈉中的任一種。

5.如權利要求1所述從乳豬皮中制備未變性天然膠原的方法，其特征在于提取劑為酸性蛋白酶或真菌復合酶。