[發明專利]產水解酶的黑曲霉及其在制備香菇酶解物中的應用

有效

• 申請號: 201310601704.X
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103614301A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 梅建鳳;陳虹;金航;應國清;王鴻;易喻;陳建澍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/14;A23L1/28;A23L1/29;C12R1/685
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

（一）技術領域

本發明涉及一株產水解酶的黑曲霉（Aspergullis?niger）MJ及其在制備香菇酶解物中的應用。

（二）背景技術

香菇，又名香蕈、香菌、冬菇、厚菇或花菇等，為擔子菌綱傘菌目側耳科香菇屬的香蕈（Lentinula?edodes）的子實體。香菇是世界第二大食用菌，也是我國特產之一，在民間素有“山珍”之稱。香菇肉質肥厚細嫩、味道鮮美、香氣沁人、營養豐富，是我國人民餐桌上傳統的美味菜肴，具有低脂肪、富含維生素和礦物元素等特點，是一種可增強人體免疫力的健康食品。

香菇不僅是人們理想的美味佳肴，而且具有良好的保健功能和較高的藥用價值。經常食用香菇可預防缺乏維生素D而引起的血磷、血鈣代謝障礙導致的佝僂病，可預防人體各種粘膜及皮膚炎類疾病。從香菇中提取的多糖，具有健胃保肝、降血糖、降血脂、提高免疫力、抗腫瘤、抗病毒和抗感染等活性，臨床應用于治療慢性病毒性肝炎和癌癥的輔助治療等，藥品有香菇多糖片和膠囊、香菇多糖注射液等。

香菇作為中國傳統的食用菌，味道鮮營養高，深受人們喜愛。目前各種香菇深加工產品品種已有很多，如香菇罐頭、香菇片、香菇精、香菇飲料和香菇米酒等，這些產品主要針對的是香菇的風味和營養價值，但針對香菇的藥用和保健功效，仍有進一步開發的余地，以更好地滿足市場的需求。

已有研究表明，香菇酶解物可以提高小鼠的免疫功能，改善腸道菌群環境，對腸道功能有一定的調節作用，具有較高的藥用和保健功效。已有文獻和專利報道采用蛋白酶、纖維素酶和5′-磷酸二酯酶等酶復合水解香菇制備酶解物的報道，這些方法雖然具有水解度高的優點，但是水解需要3種商品酶制劑，生產的成本較高，實際應用難度大。

（三）發明內容

本發明目的是提供一株水解酶產生菌——黑曲霉（Aspergullis?niger）MJ，及其在制備香菇酶解物中的應用。利用該菌株發酵制備含蛋白酶、5′-磷酸二酯酶和多糖水解酶等酶的復合水解酶系，直接用于酶解香菇得到酶解物，水解率高達35%以上，酶解物中的氨基酸含量達5.36%，5′-核苷酸含量達0.86%，多糖含量達74.2%。產品味道鮮美，營養豐富，保健功效高，可進一步深加工為香菇調味品或保健食品。

本發明采用的技術方案是：

一株黑曲霉（Aspergullus?niger）MJ，保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學，郵編：430072，保藏編號：CCTCC?NO：M2013329，保藏日期：2013年7月11日。

本發明所述黑曲霉MJ由土壤中分離和篩選，并經過誘變選育得到的優良菌株。

所述黑曲霉MJ的生長特征如下：在馬鈴薯固體培養基上，30℃條件下，培養3天，菌絲即可長滿，并產生大量孢子。菌絲初期為白色絨毛狀，之后逐漸呈黑褐色，菌落背面呈淺黃色。菌絲表層有大量黑褐色分生孢子。顯微鏡下觀察到分生孢子頭呈黑褐色放射狀，分生孢子梗長短不一，頂囊球形，雙層小梗，分生孢子黑褐色球形。

本發明還涉及所述的黑曲霉MJ在微生物發酵制備水解酶中的應用。

具體的，所述應用為：將黑曲霉MJ菌種接種至產酶培養基中，25～32℃培養2～4天，獲得含有蛋白酶、5′-磷酸二脂酶和多糖水解酶的發酵液。所得發酵液經離心或過濾除去菌體的清液為水解酶的粗酶液，可以直接應用于酶解制備香菇酶解物；也可以保藏于4℃冰箱15天內使用；也可以經過冷凍干燥，制成干酶粉保藏于4℃冰箱長期使用。

所述產酶培養基按如下組成配制：馬鈴薯100～300g（煮沸20min過濾留汁液），蔗糖20～60g，水補足至1000mL，pH4～6。

本發明還涉及所述的黑曲霉MJ在微生物酶解香菇制備香菇酶解物中的應用。

具體的，所述應用為：將黑曲霉MJ菌種接種至產酶培養基中，25～32℃培養2～4天，發酵液經固液分離獲得水解酶的粗酶液。粗酶液經過1～2倍體積的水稀釋或不經稀釋，加入足量干香菇粉（過量也可），于25～35℃、100～300r/min條件下酶解8～16h，之后，過濾去除未被酶解的香菇殘渣，濾液經濃縮、干燥和粉碎，即得香菇酶解物。

所述產酶培養基按如下組成配制：馬鈴薯100～300g（煮沸20min過濾留汁液），蔗糖20～60g，水補足至1000mL，pH4～6。

所述菌株在產酶培養前，通常需要先經斜面培養基活化培養，或再經過種子擴大培養，然后用孢子或種子液接入產酶培養基進行產酶發酵。具體的，所述活化及種子培養和產酶發酵方法如下：