[發明專利]一種膽鹽七葉苷瓊脂培養基及其應用

在審

• 申請號: 201310599731.8
• 申請日: 2013-11-25
• 公開（公告）號: CN104651253A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發明（設計）人: 劉漢斌
• 申請（專利權）人: 劉漢斌
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域????

????本發明為微生物領域，特別涉及一種膽鹽七葉苷瓊脂培養基及其應用。

背景技術????

???微生物培養（microculture)是生物培養的中的一種。所培養的微生物主要有病毒、細菌、放線菌、真菌等。微生物培養需要用到培養基，根據微生物的不同種類和生活習性來配制特定的培養基。微生物培養成功的關鍵在于無菌操作，如果培養器具和培養基不能徹底滅菌、培養的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。

腸球菌（Enterococcus）屬腸球菌屬，是人類和動物腸道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發現，既往認為腸球菌是對人類無害的共棲菌，但近年研究已證實了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的重要院內感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內膜炎和腦膜炎等。

溶血性鏈球菌，需氧或兼性厭氧菌，營養要求較高，普通培養基上生長不良，需補充血清、血液、腹水，大多數菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長因子。最適生長溫度為37℃，在20-42℃能生長，最適pH為7.4-7.6。在血清肉湯中易成長鏈，管底呈絮狀或顆粒狀沉淀生長。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0.5-0.75mm的細小菌落，不同菌株溶血不一。

糞腸球菌，根據最新分類原則，糞鏈球菌又叫糞腸球菌。應用C多糖抗原，根據蘭氏（Lancefield）血清學分類，可將鏈球菌分成許多群。糞鏈球菌屬于D群。D群鏈球菌分腸球菌和非腸球菌兩類。前者包括糞鏈球菌（S.faecalis）、屎鏈球菌（S.faecium）和堅忍鏈球菌（S.durans）,后者有牛鏈球菌（S.bovis）和馬腸鏈球菌(S.equinus)。

其營養要求低，在普通營養瓊脂上也可生長。能在10℃或45℃?pH?9.6或含6.5%NaCl肉湯培養基中生長，并能耐65℃?30分鐘。它可利用精氨酸為能源，發酵山梨醇，不發酵阿拉伯糖。在簡單的培養基上生長不需葉酸。DNA-DNA雜交結果顯示，腸球菌與鏈球菌屬同源程度低，故有學者建議另立腸球菌屬，與人類有關者為糞腸球菌（E.faecalis）和屎腸球菌（E.faecium）。

培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素，用于單種微生物培養和鑒定。培養基由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基（如組織培養基），較長時間的貯存，必須放在3~6℃的冰箱內。由于液體培養基不易長期保管，現在均改制成粉末。

培養基根據化學分類為天然培養基、組合培養基和半組合培養基；根據物理分類為液體培養基、固定培養基和脫水培養基；根據微生物分類為選擇性培養基、鑒別培養基。

發明內容

?????本發明克服現有技術中的不足，提供一種膽鹽七葉苷瓊脂培養基及其應用。

?????本發明運用生物化學，微生物學及無機、有機、分析化學和熒光技術的原理，對不同的碳源、氮源、無機鹽類、維生素、生長促進劑等諸類營養組分的組合進行篩選，對培養基的pH值、離子強度、氧化-還原電勢、表面張力、氣體環境等物化因子進行了比較，研究出了本發明的培養基。

?????本發明所采用的技術方案為：

?????一種膽鹽七葉苷瓊脂培養基，所述培養基的組分包括30.2g/L肉浸液肉湯、4.0g/L酵母浸粉、18g/L牛膽鹽?、0.88g/L檸檬酸鐵、0.45g/L檸檬酸鈉、0.28g/L磷酸二氫鉀、1.2g/L七葉苷?、15.0?g/L瓊脂，pH值為6.9-7.3?。

????在以上方案的基礎上，所述的肉浸液肉湯為每升肉浸液肉湯中含有牛肉粉3.0g、氯化鈉5.0g、胰酪蛋白胨12.0g、磷酸氫二鉀2.0g。

????本發明還公開了一種膽鹽七葉苷瓊脂培養基的應用，用于腸球菌和腸道致病菌的分離培養。

????蛋白胨提供氮源、維生素和生長因子；細菌水解七葉苷與檸檬酸鐵中鐵離子反應形成黑色的6,7-二羥基香豆素；牛膽鹽為選擇性抑菌劑，抑制非鏈球菌的細菌；瓊脂是培養基的凝固劑。