[發(fā)明專利]一種甘露醇高鹽瓊脂及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310599442.8
• 申請(qǐng)日: 2013-11-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104651248A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉漢斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 劉漢斌
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/445
• 代理公司: 無(wú)
• 代理人: 無(wú)

技術(shù)領(lǐng)域????

????本發(fā)明為微生物領(lǐng)域，特別涉及一種甘露醇高鹽瓊脂及其應(yīng)用。

背景技術(shù)????

????金黃色葡萄球菌，也稱“金葡菌”，細(xì)胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)比革蘭氏陰性菌致密，染色時(shí)結(jié)晶紫附著后不被酒精脫色故而呈現(xiàn)紫色，相反，陰性菌的細(xì)胞壁肽聚糖層薄、交聯(lián)度差，脂類含量高，所以紫色復(fù)合物被酒精沖掉然后附著了沙黃的紅色。金黃色葡萄球菌與青霉素的發(fā)現(xiàn)有很大的淵源。當(dāng)年弗萊明就是在他的金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)皿中發(fā)現(xiàn)有些球菌被殺死了，于是發(fā)現(xiàn)了青霉素。而研究也表明青霉素只對(duì)以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽(yáng)性菌作用明顯。這也是由肽聚糖層的厚度和結(jié)構(gòu)造成的。新出現(xiàn)的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，被稱作超級(jí)細(xì)菌，幾乎能抵抗人類所有的藥物，但是萬(wàn)古霉素可以對(duì)付它。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。

????金黃色葡萄球菌無(wú)芽胞、鞭毛，大多數(shù)無(wú)莢膜，革蘭氏染色陽(yáng)性。金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，需氧或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度37°C，最適生長(zhǎng)pH7.4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0.5~1.0mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10~15%NaCl肉湯中生長(zhǎng)。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽(yáng)性，VP反應(yīng)弱陽(yáng)性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對(duì)磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性，原因是由于這些菌株產(chǎn)生青霉素酶等。對(duì)堿性染料敏感，十萬(wàn)分之一的龍膽紫液即可抑制生長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

?????本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種甘露醇高鹽瓊脂及其應(yīng)用。

?????本發(fā)明運(yùn)用生物化學(xué)，微生物學(xué)及無(wú)機(jī)、有機(jī)、分析化學(xué)和熒光技術(shù)的原理，對(duì)不同的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽類、維生素、生長(zhǎng)促進(jìn)劑等諸類營(yíng)養(yǎng)組分的組合進(jìn)行篩選，對(duì)培養(yǎng)基的pH值、離子強(qiáng)度、氧化-還原電勢(shì)、表面張力、氣體環(huán)境等物化因子進(jìn)行了比較，研究出了本發(fā)明的培養(yǎng)基。

?????本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

????一種甘露醇高鹽瓊脂，所述培養(yǎng)基的組分包括18.2g/L?7.5%氯化鈉肉湯、8.0g/L?D-甘露醇、0.032g/L酚紅、15.0g/L瓊脂，pH值為7.2-7.6；

????在以上方案的基礎(chǔ)上，所述7.5%氯化鈉肉湯為每升7.5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10.0g?、牛肉粉5.0g、氯化鈉75.0g、磷酸氫二鉀2.0g。

????本發(fā)明還公開(kāi)了所述的甘露醇高鹽瓊脂的應(yīng)用，用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)。

????蛋白胨和牛肉粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；D-甘露醇為可發(fā)酵糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；酚紅為pH指示劑。

????稱取本品?88.25g，加入?1000ml?蒸餾水中，加熱溶解并不停攪拌煮沸?1?分鐘。121℃高壓滅菌15分鐘，冷至45-50℃左右時(shí)，傾入無(wú)菌平皿。????

??????本發(fā)明的有益效果：

??????1、培養(yǎng)基組方簡(jiǎn)單，制備操作方便，成本低，利于推廣應(yīng)用；

??????2、菌生長(zhǎng)迅速，變異率低；

??????3、便于觀察，分析。

具體實(shí)施方式???

實(shí)施例1：

??????一種甘露醇高鹽瓊脂，所述培養(yǎng)基的組分包括18.2g/L?7.5%氯化鈉肉湯、8.0g/L?D-甘露醇、0.032g/L酚紅、15.0g/L瓊脂，pH值為7.2-7.6；

????所述7.5%氯化鈉肉湯為每升7.5%氯化鈉肉湯中含有胰蛋白胨10.0g?、牛肉粉5.0g、氯化鈉75.0g、磷酸氫二鉀2.0g。

????蛋白胨和牛肉粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；D-甘露醇為可發(fā)酵糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；酚紅為pH指示劑。

????稱取本品?88.25g，加入?1000ml?蒸餾水中，加熱溶解并不停攪拌煮沸?1?分鐘。121℃高壓滅菌15分鐘，冷至45-50℃左右時(shí)，傾入無(wú)菌平皿。????

??在37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)

質(zhì)控菌株生長(zhǎng)情況菌落顏色金黃色葡萄球菌+++黃色大腸桿菌+/--沙門氏菌+無(wú)色