[發(fā)明專(zhuān)利]趕黃草的質(zhì)量檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310596386.2
• 申請(qǐng)日: 2013-11-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103822888A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 稅丕先;朱燁;歐麗蘭;李婷;余昕;張春;莊元春;李建;盧娟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 瀘州醫(yī)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/33
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/33;G01N30/02;G01N30/90
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;全學(xué)榮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及趕黃草的質(zhì)量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

趕黃草為虎耳草科趕黃草屬植物趕黃草Penthorum?chinense?Pursh的干燥地上部分，收載于1993年版《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》。主含黃酮類(lèi)、揮發(fā)油等成分。其中已確定沒(méi)食子酸和槲皮素為已知具有抗乙肝病毒和保肝作用的成分，是趕黃草的有效成分。據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)資料，僅見(jiàn)對(duì)其化學(xué)成分的研究報(bào)道，以及含該藥材的中成藥肝蘇顆粒用于治療肝炎及抗肝纖維化等臨床報(bào)道。但多年來(lái)未見(jiàn)《湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》修正趕黃草項(xiàng)，并且該標(biāo)準(zhǔn)中主要以槲皮素的含量為標(biāo)準(zhǔn)，難以對(duì)趕黃草藥材及其制劑進(jìn)行全面評(píng)價(jià)和有效的質(zhì)量控制。

申請(qǐng)?zhí)枺?01210490728.8，發(fā)明名稱(chēng)：扯根菜提取物的制備方法，其中公開(kāi)了總黃酮的含量測(cè)定方法，采用紫外分光光度法在350nm吸光度下測(cè)定總黃酮含量。郭亞健，范麗，張珍蘭，等.關(guān)于比色法測(cè)定總黃酮方法的探討[J].藥物分析雜志，2002，22(2):97；馬陶陶，張群林，李俊，等.三氯化鋁比色法測(cè)定中藥總黃酮方法的探討[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(1):54。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了趕黃草的質(zhì)量檢測(cè)方法。

本發(fā)明提供了趕黃草的質(zhì)量檢測(cè)方法，它包括檢測(cè)趕黃草中的總黃酮和槲皮素；

其中，總黃酮的含量檢測(cè)方法是采用UV法測(cè)定趕黃草中的總黃酮的含量，它包括如下步驟：

a、溶液的制備

蘆丁對(duì)照品溶液的制備精確稱(chēng)取蘆丁10.6mg于10mL燒杯中，以50%乙醇溶解，定容于100mL容量瓶中，濃度為0.106mg·mL^-1；

供試品溶液的制備精密稱(chēng)取趕黃草細(xì)粉約0.1g于50mL具塞錐形瓶中，100∶1的比例分別于5個(gè)錐形瓶中各加入70%乙醇溶液10mL，搖勻，密封，避光處?kù)o置1h，于超聲波清洗器中超聲提取1h，搖勻，靜置冷卻，取續(xù)濾液；

b、測(cè)定方法及測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取蘆丁對(duì)照品溶液和供試品溶液各0.2mL于5mL容量瓶，加水至刻度，搖勻，加0.1mol·mL^-1三氯化鋁溶液1mL，加水定容至10mL，搖勻靜置30min，用紫外分光光度計(jì)掃描，測(cè)定波長(zhǎng)為417nm；

槲皮素的檢測(cè)方法包括薄層色譜檢測(cè)法和高效液相色譜法；

其中，薄層色譜檢測(cè)方法包括如下步驟：

a、供試品溶液制備：取趕黃草細(xì)粉，加入50%-70%的乙醇超聲提取，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙猓檬兔演腿。瑮壢ナ兔眩杭酉←}酸，置100℃水浴鍋中水解，取出，迅速冷卻，用乙酸乙酯振搖提取，合并乙酸乙酯液，用水洗滌，棄去水洗液，乙酸乙酯液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ト芙猓^(guò)濾，作為供試品溶液；

b、對(duì)照品溶液制備：取槲皮素對(duì)照品加乙酸乙酯溶解制成每1mL含0.5mg的對(duì)照品溶液；

c、分別取a步驟的供試品和對(duì)照品溶液，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸（10∶8∶3）為展開(kāi)劑，預(yù)飽和10min，上行展開(kāi)，取出，晾干，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的亮黃色的斑點(diǎn)；再?lài)娨?％三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；

所述的HPLC法測(cè)定趕黃草槲皮素的含量：

色譜條件：色譜柱：Dikma?Kromasil?C₁₈(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1％磷酸(52∶48)；檢測(cè)波長(zhǎng)：366nm；柱溫：40℃；流速：1.0mL·min^-1；進(jìn)樣量：10μL。

其中，所述的槲皮素的檢測(cè)方法中薄層色譜檢測(cè)方法a步驟中乙醇濃度為70%。

其中，槲皮素的檢測(cè)方法中槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品Rf=0.47。

其中，所述的HPLC法測(cè)定趕黃草槲皮素的含量中，對(duì)照品溶液的制備方法為：精密稱(chēng)取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的槲皮素對(duì)照品4.23mg置100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得濃度為42.3μg·mL^-1的槲皮素對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備：精密稱(chēng)取趕黃草粗粉0.5g，加入10mL甲醇，超聲提取1h，過(guò)濾，取5mL加24%鹽酸水解1.5h，蒸干，甲醇定容于5mL容量瓶，作為供試品溶液。