[發明專利]IgE介導肥大細胞脫顆粒模型的建立

有效

• 申請號: 201310594931.4
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103614337A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 孫仁山;陳曉紅;楊永強;冉新澤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第三附屬醫院
• 主分類號: C12N5/0787
• 分類號: C12N5/0787
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

1.一種建立人肥大細胞脫顆粒模型的方法，其特征在于，包含步驟：

1）提供肥大細胞系細胞，檢測細胞的生長曲線；

2）建立1種或多種指標物檢測的標準曲線；

3）活化步驟1）所述的肥大細胞系細胞，將活化的肥大細胞系細胞在900rpm×5min離心，取上清液作為檢測樣本；

4）使用如步驟2）所述的1種或多種指標物檢測步驟3）所述的檢測樣本。

2.如權利要求1所述的建立人肥大細胞脫顆粒模型的方法，其特征在于，步驟3）所述的活化步驟1）所述的肥大細胞系細胞的步驟是：

a)將所述肥大細胞系細胞離心后用臺式液重懸，并調整細胞濃度為1×10⁶細胞/ml；

b)取5份細胞懸液，分別加入Biotin-IgE使所述Biotin-IgE的終濃度分別為0、50、100、500、1000ng/ml；

c)將如步驟b)所述分別添加過Biotin-IgE的細胞懸液置于37℃孵育2小時；

d)將如步驟c)所述孵育后的5份細胞懸液離心去除上清，得到5份細胞沉淀物；

e)向步驟d)所述的5份細胞沉淀物中分別添加臺式液，并且分別添加鏈霉親和素，使每份中所述鏈霉親和素終濃度為1000ng/ml，混勻并重懸細胞，得到5份細胞重懸液；

f)將步驟e)所述的5份細胞重懸液37℃孵育半小時，吹打細胞至懸浮，900g×5min離心。

3.如權利要求1所述的建立人肥大細胞脫顆粒模型的方法，其特征在于，步驟1）所述的肥大細胞系細胞為LAD2細胞。

4.如權利要求1或2所述的建立人肥大細胞脫顆粒模型的方法，其特征在于，步驟2）所述的指標物為組胺和/或β-氨基己糖苷酶。

5.一種根據權利要求1-3任一項所述的方法建立的人肥大細胞脫顆粒模型。