[發(fā)明專利]一種同時定量檢測多個受體的抗體芯片試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310593767.5
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN104655851B
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設計）人: 毛應清;黃若磐
• 申請（專利權）人: 廣州瑞博奧生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

本發(fā)明公開了一種同時定量檢測多個受體的抗體芯片試劑盒。該試劑盒包括：抗體芯片，選用標準組織玻片作為表面載體，該標準組織玻片采用活性氨基團包被，使多種抗原特異性抗體通過非接觸性點樣儀牢固地吸附在玻片表面，形成16個微陣列；并用相配套可拆裝的2x8孔塑料框架及乳膠封閉框將16個微陣列分隔在互不干擾的小區(qū)內。每個捕獲抗體在每個抗體微陣列中有四次的重復點樣；受體標準品混合物；生物素標記的檢測抗體混合物；Cy3熒光染料標記的鏈霉親和素。本發(fā)明的抗體芯片試劑盒能夠同時定量檢測多項受體，受體的動態(tài)檢測范圍更廣，從單一的樣品實驗中可以得到四倍于ELISA的重復數據，具有高靈敏度、高通量、樣品需用量少、廉價、易推廣等優(yōu)點。

技術領域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學技術領域，尤其涉及一種同時定量檢測多個受體的抗體芯片試劑盒。

技術背景

受體（receptor）是一種能與細胞外專一信號分子（配體）結合引起細胞反應的蛋白質。

受體分為細胞表面受體和細胞內受體。受體與配體結合即發(fā)生分子構象變化，從而引起細胞反應，如介導細胞間信號轉導、細胞間黏合、細胞胞吞等細胞過程。受體在細胞膜上或細胞內能識別生物活性分子并與之結合，把識別和接受的信號正確無誤地放大并傳遞到細胞內部，從而激活或啟動一系列生物化學反應，最后導致該信號物質特定的生物效應。通常受體具有兩個功能：一是識別特異的信號物質--配體，識別的表現在于兩者結合。配體，是指這樣一些信號物質，除了與受體結合外本身并無其他功能，它不能參加代謝產生有用產物，也不直接誘導任何細胞活性，更無酶的特點，它唯一的功能就是通知細胞在環(huán)境中存在一種特殊信號或刺激因素；二是把識別和接受的信號準確無誤的放大并傳遞到細胞內部，啟動一系列胞內生化反應，最后導致特定的細胞反應，促進靶細胞的增殖和分化，增強抗感染和殺腫瘤細胞效應，促進或抑制細胞因子的合成，促進炎癥過程，影響細胞代謝等。

受體研究具有非常重要的理論和實用意義，它從分子水平來闡明激素、遞質、藥物、抗體的作用機制及生理和病理過程的，已成為科學技術的前沿陣地之一。

目前常用的受體檢測方法主要包括：酶聯免疫吸附法（ELISA），放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA），免疫印跡法（western blot），流式細胞儀（Flow-Cytometry）等。其中，酶聯免疫吸附法是最普遍的方法，具靈敏度高、特異性較好、操作簡便等優(yōu)點。但一次試驗只能檢測單一指標，通量低、成本高，在具有多指標特性的受體檢測中，該方法存在明顯的不足；放射免疫分析（RIA）雖然靈敏度高，是由于具有放射性污染，現在已很少采用；免疫印跡法能測定分子的大小，且無非特異的反應，但操作繁瑣，靈敏度低，且只能檢測單一指標，不適合運用于受體的檢測；流式細胞儀能在細胞水平上檢測受體的水平，但卻存在低靈敏、低通量、高成本等缺點。

有鑒于此，有必要開發(fā)一種新型的多種受體定量檢測試劑盒，以克服現有技術中亟待解決的問題，實現多種受體的高通量、高靈敏度、高特異性和低成本檢測。在本發(fā)明中，我們選用沒有空間限制的標準組織玻片作為載體，可使點在同一微陣列上檢測受體的數目可以不 受空間的限制。由于玻片具有非常低的自身熒光，而且熒光信號不具擴散性，不同點間的熒光信號不會彼此干擾，所以一次可以同時檢測幾十個受體。本發(fā)明采用抗體夾心法原理在玻片表面進行多重ELISA反應，不僅一次可以檢測多達幾十個受體，并且所檢測的受體靈敏度可達單因子的ELISA檢測靈敏度。

發(fā)明內容

針對現有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種同時定量檢測多個受體的抗體芯片試劑盒，能在標準組織玻片上進行高通量、高靈敏度、高特異性和低成本的受體定量檢測。