[發明專利]一種快速提取分離植物葉多酚氧化酶的方法

有效

• 申請號: 201310593709.2
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103614356A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 楊洋;嚴東;趙芬芬;葉琴;馬萬良;胡振興
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 彭曉玲

1.一種快速提取分離植物葉多酚氧化酶的方法，包括以下步驟：

1）取植物葉，加入緩沖液，搗碎、浸提抽濾、收集濾液，離心收集粗酶液；

2）粗酶液超濾后利用反膠團萃取；

3）萃取結束后濃縮、冷凍干燥得多酚氧化酶粉末。

2.根據權利要求1所述的快速提取分離植物葉多酚氧化酶的方法，其特征在于：步驟1）所述的每100g植物葉需加入400ml緩沖液，所述的緩沖液為0.1mol/L磷酸緩沖液，PH為6。

3.根據權利要求1所述的快速提取分離植物葉多酚氧化酶的方法，其特征在于：步驟1）所述的浸提溫度為4℃，浸提時間6h。

4.根據權利要求1所述的快速提取分離植物葉多酚氧化酶的方法，其特征在于：步驟2）所述的超濾采用的超濾離心管的膜直徑為30ku。

5.根據權利要求1所述的快速提取分離植物葉多酚氧化酶的方法，其特征在于：步驟2）中的反膠團萃取包括前萃取和后萃取，前萃取水相為超濾后的粗酶液，有機相為CTAB-異辛烷溶液，CTAB加入量為50～100mmol/L，最適加入量為75mmol/L，有機相和水相體積比為1∶1，前萃取溫度為28～32℃，最適溫度為30℃，前萃取時間為15min；后萃取水相為0.5mol/L的NaCl溶液，NaCl溶劑為0.1mol/L的檸檬酸緩沖液，后萃取水相和有機相體積比為1∶1，后萃取溫度為28～32℃，最適溫度為30℃，后萃取時間為30min。

6.根據權利要求5所述的快速提取分離植物葉多酚氧化酶的方法，其特征在于：步驟2）的后萃取階段采用超聲波輔助提取，超聲波功率為120W，時間為30min。