[發明專利]冷休克誘導大鱗副泥鰍雄核發育單倍體的方法

無效

• 申請號: 201310592906.2
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103651195A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 李雅娟;姜志強;周賀;王玉生;李佳奇
• 申請（專利權）人: 大連海洋大學;李雅娟
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 大連非凡專利事務所 21220
• 代理人: 田和穗

技術領域

本發明涉及一種魚類雄核發育單倍體的方法，特別是一種冷休克誘導大鱗副泥鰍雄核發育單倍體的方法。

背景技術

雄核發育（androgenesis）是指用精子生產只帶父系遺傳物質個體的繁殖方式。可用于純系的建立，同時可冷藏瀕危物種的精子，對物種的保護具有特殊的意義。另外，在水產養殖上，由于很多重要經濟魚類不同性別往往表現出不同的生產性能，如體型和體色的差異，生長速度的快慢，性成熟時間的不同等。如飼養137天后莫桑比克羅非魚的雄魚體重增長速度比雌魚快1.74倍；又如飼養2年的黃顙魚，雌性體重一般為100~200?g，雄性體重一般為200~350?g。所以，通過雄核發育控制魚類的性別，選擇具有最佳生長性能的雄性進行單性養殖，具有極為重要的應用價值。

關于人工誘導雄核發育的研究多見于魚類，已成功培育出川鰈(Platichthys?flesus)、馬蘇大麻哈魚(Oncorhynchus?msou)、虹鱒(Oncorhynchus?mykiss)、溪紅點鮭(Salvelinus?fontinalus)、鯉魚(Cyprinus?carpio)、鯽魚(Carassius?auratus)、吉福羅非魚(Oreochromis?niloticus)、泥鰍(Misgurnus?anguillicaudrus)、大鱗副泥鰍(Paramisgurnus?dabryanus)、斑馬魚(Danio?rerio)、虎皮魚(Puntius?tetrazona)等雄核發育二倍體。但是雄核發育二倍體的成活率極低。人工誘導魚類雄核發育的方法主要包括兩個步驟，即卵細胞染色體遺傳失活及精子染色體加倍。卵細胞染色體遺傳失活是人工誘導雄核發育的關鍵技術之一。在魚類雄核發育的誘導中γ射線、Х射線及紫外線(UV)是常用的遺傳失活手段。此種滅活方法雖然簡單易行，但是用射線破壞卵子細胞核的同時，細胞質和其他細胞器也會遭受到不同程度的破壞，導致其受精后不能正常發育。因此現在需要一種新的雄核發育單倍體的方法出現。

發明內容

本發明是為了解決現有技術所存在的上述不足，提出一種無需卵子失活、可快速、高效生產大鱗副泥鰍雄核發育單倍體的方法。

本發明的技術解決方案是：一種冷休克誘導大鱗副泥鰍雄核發育單倍體的方法，其特征在于：所述的方法按照以下步驟進行：

a、取性腺發育良好的大鱗副泥鰍進行催產，分別取雄性大鱗副泥鰍的精液和雌性大鱗副泥鰍的卵子，將所得的精液用Kurokura’s?solution溶液稀釋80-120倍，

b、將稀釋后的精子與卵子混合形成受精卵，將受精卵至于2.5-3.5℃的水中，冷休克處理50-70min，然后將受精卵放入常溫水中進行孵化。

本發明同現有技術相比，具有如下優點：

本發明所公開的誘導大鱗副泥鰍雄核發育單倍體的方法，是取雄性大鱗副泥鰍的精液及雌性大鱗副泥鰍的卵子形成受精卵，只用冷休克處理的方法，讓受精卵快速、高效的生產雄核發育單倍體。該方法無需卵子遺傳失活，也避免了繁瑣的操作程序，具有廉價、易操作等優點，解決了現有理化誘導對受精卵造成傷害的問題,?提高了雄核發育單倍體泥鰍孵化率和成活率，有利于大規模生產使用。其市場前景十分廣泛，經濟潛力巨大。

附圖說明

圖1是本發明實施例所制備的雄核發育單倍體大鱗副泥鰍染色體（n=24）的圖片。

圖2是對照組（2n♀×?2n♂）大鱗副泥鰍染色體（2n=48）的圖片。

具體實施方式

下面將結合附圖說明本發明實施例的具體實施方式，如圖1、圖2所示：一種冷休克誘導大鱗副泥鰍雄核發育單倍體的方法，按照以下步驟進行：

取發育良好的雄性大鱗副泥鰍及雌性大鱗副泥鰍，用傳統的催產方法進行催產，水溫23±1℃，效應時間10~12小時，確認排卵后，輕壓腹部采集雌性大鱗副泥鰍的卵子，并用毛細管采集雄性大鱗副泥鰍的精液，所得精液用Kurokura’s?solution溶液稀釋80-12倍待用，其稀釋倍數以100倍為最佳；Kurokura’s?solution溶液的配制方法是現有技術，即NaCl?750?mg,?CaCl2?20?mg,?NaHCO3?20?mg,?KCl?20?mg溶于100?ml蒸餾水中；