[發明專利]骨髓細胞培養終止液及應用

有效

• 申請號: 201310591779.4
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103667458A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 程建兵;夏成青;陳紅梅;郭福曉;生帥
• 申請（專利權）人: 武漢艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N1/30
• 代理公司: 杭州裕陽專利事務所(普通合伙) 33221
• 代理人: 江助菊

技術領域

本發明屬生物技術領域，特別涉及一種醫學檢驗領域中用于染色體核型分析的骨髓細胞培養終止液及應用。

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背景技術

G顯帶因為染色體主要是被Giemsa染料染色后而顯帶，故稱之為G顯帶技術，其所顯示的帶紋分布在整個染色體上。人們將用各種不同的方法，以及用不同的染料處理染色體標本后，使每條染色體上出現明暗相間，或深淺不同帶紋的技術稱為顯帶技術（banding?technique）。本世紀70年代以來，顯帶技術得到了很大發展，且在眾多的顯帶技術中（Q帶、G帶、C帶、R帶、T帶），G帶是目前被廣泛應用的一種帶型。

研究發現，人染色體標本經胰蛋白酶、Na0H、檸檬酸鹽或尿素等試劑處理后，再用Giemsa染色，可使每條染色體上顯示出深淺交替的橫紋，這就是染色體的G帶。每條染色體都有其較為恒定的帶紋特征，所以G顯帶后，可以較為準確的識別每條染色體，并可發現染色體上較細微的結構畸變。

近年來，隨著分子生物學與細胞遺傳學的發展，骨髓染色體核型分析在血液系統疾病的診斷、治療和預后中發揮了越來越重要的作用。骨髓染色體的制備因骨髓中有大量脂肪顆粒的干擾,?骨髓中各種細胞系的細胞周期不固定,?不統一,?難以區別對待而使得骨髓染色體分裂指數低,?染色體短粗,?分散度差，且成本較高。

因此，建立一種具有分裂相多、分散度好、帶紋清晰、長度適中等特征的骨髓G帶制作方法尤為重要。

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發明內容

為了克服現有技術中的存在的問題，本發明提供了一種骨髓細胞培養終止液，包括溴化乙錠和秋水仙胺，其中，溴化乙錠濃度為1.5～5.5mg/ml，秋水仙胺濃度為8～15μg/ml。

進一步地，溴化乙錠濃度為3mg/ml，秋水仙胺濃度為12μg/ml。

進一步地，溴化乙錠的配制方法如下：

a.?配制儲藏液（9mg/ml）

在100ml蒸餾水中加入0.9g溴化乙錠，磁力攪拌數小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中，保存于室溫；

b.?配制工作液（3mg/ml）

儲藏液以1：2（EB:ddH₂O）的比例稀釋成濃度為3mg/ml的工作液。

進一步地，秋水仙胺的配制方法如下：

a.配制儲藏液（120μg/ml）

稱取12?mg秋水仙胺，加入8.5g/L?NaCl溶液100mL，待完全溶解后，經5.516×10⁴Pa（81bf/in2）15min高壓蒸汽滅菌后避光保存于4℃冰箱中；?

b.配制工作液（12μg/ml）

取120μg/ml秋水仙胺溶液1mL加入8.5g/L?NaCl溶液9mL即為12μg/ml的工作液。

本發明還提供了所述的骨髓細胞培養終止液在骨髓染色體標本制作中的應用，以培養基用量為5ml計，向培養基中加入50μl的溴化乙錠和25μl的秋水仙胺。

進一步地，將溴化乙錠和秋水仙胺加入培養基，搖晃均勻后37℃，5.0%CO₂培養箱孵育1小時。

本發明的有益效果是：在終止細胞培養時加入一定量的溴化乙錠（EB）可以使染色體長度增加，使分裂相中染色體的長度更長，帶紋更加清晰，具有省時、省力的優勢，且準確性更高，在醫學檢驗領域具有更廣泛的應用前景。

附圖說明

圖1是利用實驗組1所得染色體標本鏡檢結果。

圖2是利用實驗組2所得染色體標本鏡檢結果。

圖3是利用實驗組3所得染色體標本鏡檢結果。

圖4是利用對照組所得染色體標本鏡檢結果。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。

實施例?1?配制骨髓細胞培養終止液

骨髓細胞培養終止液包括1.5～5.5mg/ml的溴化乙錠和8～15μg/ml的秋水仙胺。

其中所述溴化乙錠和秋水仙胺的配制方法可以采用本實施例所述的方法，也可以采用本領域其它的方法配制。

A?配制溴化乙錠

a.配制儲藏液（濃度為9mg/ml）

在100ml蒸餾水中加入0.9g溴化乙錠，磁力攪拌數小時以確保其完全溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中，保存于室溫。

b.配制工作液（濃度為3mg/ml）

儲藏液以1：2（EB:ddH₂O）的比例稀釋成濃度為3mg/ml的工作液。

B配制秋水仙胺??