[發明專利]骨髓細胞培養基

有效

• 申請號: 201310591742.1
• 申請日: 2013-11-22
• 公開（公告）號: CN103667183B
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 程建兵;夏成青;陳紅梅;郭福曉;生帥
• 申請（專利權）人: 南昌艾迪康臨床檢驗所有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;G01N1/28
• 代理公司: 杭州知通專利代理事務所(普通合伙) 33221
• 代理人: 江助菊

本發明公開了一種醫學檢驗領域中用于染色體核型分析的骨髓細胞培養基配方，其在基礎培養基中添加了青霉素/鏈霉素、胎牛血清和人類淋巴瘤細胞培養物。利用本發明的培養基制備出的骨髓細胞制作出的染色體G帶，背景更加清晰，分裂相更多，形態及分散度更加良好，便于分析。此種配方用于骨髓染色體核型分析時，具有省時、省力的優勢，且準確性更高，在醫學檢驗領域具有更廣泛的應用前景。

技術領域

本發明屬生物技術領域，特別涉及醫學檢驗領域中用于染色體核型分析的骨髓細胞培養基配方。

背景技術

G顯帶因為染色體主要是被Giemsa染料染色后而顯帶，故稱之為G顯帶技術，其所顯示的帶紋分布在整個染色體上。人們將用各種不同的方法，以及用不同的染料處理染色體標本后，使每條染色體上出現明暗相間，或深淺不同帶紋的技術稱為顯帶技術（bandingtechnique）。本世紀70年代以來，顯帶技術得到了很大發展，且在眾多的顯帶技術中（Q帶、G帶、C帶、R帶、T帶），G帶是目前被廣泛應用的一種帶型。

研究發現，人染色體標本經胰蛋白酶、Na0H、檸檬酸鹽或尿素等試劑處理后，再用Giemsa染色，可使每條染色體上顯示出深淺交替的橫紋，這就是染色體的G帶。每條染色體都有其較為恒定的帶紋特征，所以G顯帶后，可以較為準確的識別每條染色體，并可發現染色體上較細微的結構畸變。

近年來，隨著分子生物學與細胞遺傳學的發展，骨髓染色體核型分析在血液系統疾病的診斷、治療和預后中發揮了越來越重要的作用。骨髓染色體的制備因骨髓中有大量脂肪顆粒的干擾, 骨髓中各種細胞系的細胞周期不固定, 不統一, 難以區別對待而使得骨髓染色體分裂指數低, 染色體短粗, 分散度差，且成本較高。

因此，建立一種具有背景更加清晰、分裂相多、形態及分散度良好等特征的骨髓培養基配方尤為重要。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的缺陷，提供一種骨髓細胞培養基，其在基礎培養基中添加了青霉素/鏈霉素、胎牛血清和人類淋巴瘤細胞培養物；

基礎培養基：RPMI1640培養基

所述各添加成分的用量如下：

青霉素/鏈霉素 5-15ul/ml

胎牛血清 60-140 ul/ml

人類淋巴瘤細胞培養物 60-140 ul/ml

進一步地，青霉素選自10000U/ml，鏈霉素選自10000μg/ml。

進一步地，人類淋巴瘤細胞培養物由以下方法制取：細胞復蘇和傳代，當傳代細胞培養基顏色變為黃色時，收集細胞并離心，離心后，收集上清并過濾得細胞培養物。

進一步地，所述各添加成分用量如下：

青霉素/鏈霉素 8ul/ml

胎牛血清 96ul/ml

人類淋巴瘤細胞培養物 96ul/ml

本發明還提供了骨髓細胞培養基在骨髓染色體制片中的應用，將骨髓細胞以1～3×10⁶個/ml的密度接種到所述的骨髓培養基中，放入37℃，5.0%CO₂培養箱培養24小時。