[發明專利]抗日本血吸蟲Sjp40雞卵黃抗體及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 201310589411.4
• 申請日: 2013-11-20
• 公開（公告）號: CN103554257A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 趙小玲;陳偉強;閆俊;王儷蒙;王尚;王濤;王軍;孫思明
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所
• 主分類號: C07K16/20
• 分類號: C07K16/20;C07K16/02;G01N33/569
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

1.抗日本血吸蟲Sjp40雞卵黃抗體，其特征在于：可與Sjp40特異性結合，其抗原特異性結合活性檢測中可識別Sjp40，且OD值隨著抗體稀釋度降低而減小,具有抗原濃度依賴性，所述抗體是由下述方法得到的：

（1）收集用純化的SjP40抗原初次免疫的健康SPF級產蛋雞的雞蛋，采用水稀釋硫酸銨沉淀法從雞蛋中初步提取IgY；

（2）再依次經透析袋、DEAE-FF陰離子交換柱進一步純化IgY；

（3）用聚丙烯酰胺凝膠電泳、Western?blotting及ELISA對IgY進行分析鑒定。

2.權利要求1所述的抗日本血吸蟲Sjp40雞卵黃抗體的制備方法，其特征在于：具體步驟為：

（1）收集用純化的SjP40抗原初次免疫的健康SPF級產蛋雞的雞蛋，采用水稀釋硫酸銨沉淀法從雞蛋中初步提取IgY；

（2）再依次經透析袋、DEAE-FF陰離子交換柱進一步純化IgY；

（3）用聚丙烯酰胺凝膠電泳、Western?blotting及ELISA對IgY進行分析鑒定。

3.根據權利要求2所述的抗日本血吸蟲Sjp40雞卵黃抗體的制備方法，其特征在于：具體步驟為：

（1）收集用純化的SjP40抗原初次免疫的健康SPF級產蛋雞的雞蛋，取卵黃與蒸餾水按1:8稀釋，鹽酸調PH至4.2-4.4，攪勻4℃靜置過夜后，4℃，12000r/min離心30min收集上清得水溶性組分。向WSF中滴加等體積40%硫酸銨鹽析，再同上法4℃靜置過夜并離心；

（2）用適量1×PBS重懸沉淀，置常規處理過的透析袋中，4℃下PBS透析48h，每隔4h換次透析液，最后聚乙二醇20000濃縮至2ml，-20℃保存備用；采用HiTrap?DEAE-FF陰離子交換預裝柱進一步純化，上樣平衡緩沖液為0.01mol/L、PH=7.4的磷酸鹽緩沖液，洗脫緩沖液為含終濃度為1mol/L?NaCl的PH=7.4的磷酸鹽緩沖液，抗Sjp40IgY用上樣平衡緩沖液稀釋經0.22um微孔濾膜脫氣緩慢進樣，線性梯度洗脫，線速度1ml/min，最后收集的洗脫峰-20℃保存；

（3）用聚丙烯酰胺凝膠電泳、Western?blotting及ELISA對IgY進行分析鑒定。

4.權利要求1所述的抗日本血吸蟲Sjp40雞卵黃抗體在識別Sjp40方面的應用。

5.根據權利要求4所述的抗日本血吸蟲Sjp40雞卵黃抗體在制備膠體金診斷試紙條或診斷試劑盒中的應用。