[發明專利]一種同時測定人血清氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白的化學發光成像免疫分析方法

無效

• 申請號: 201310589176.0
• 申請日: 2013-11-20
• 公開（公告）號: CN103630695A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 汪俊軍;于瑞杰;宋佳希;吳嘉;牛冬梅;馬麗娟
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍南京軍區南京總醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 夏平;李曉峰

1.一種同時檢測血清樣品中多種氧化脂蛋白含量的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于包含以下步驟：

步驟1：在硅烷化修飾的載玻片陣列上，包被捕獲抗體，溫育、洗滌、封閉，制成固相抗體；

步驟2：向步驟1制備的固相抗體的微孔中加入相應的標準系列溶液，溫育、洗滌；加入相應的辣根過氧化物酶標記的抗體，溫育、洗滌；然后加入化學發光底物魯米諾-過氧化氫，通過CCD進行化學發光圖像的檢測；根據標準溶液濃度及對應的化學發光強度值繪制標準曲線；

步驟3：向步驟1制備的固相抗體的微孔中加入相應的待測血清樣品，溫育、洗滌，加入相應的辣根過氧化物酶標記的抗體，溫育、洗滌；然后加入化學發光底物魯米諾-過氧化氫，通過CCD進行化學發光圖像的檢測；根據步驟2繪制的標準曲線，計算出樣品中不同氧化脂蛋白的濃度。

2.根據權利要求1所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，步驟1中所述的捕獲抗體為兔抗人氧化低密度脂蛋白抗體。

3.根據權利要求2所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，所述兔抗人氧化低密度脂蛋白抗體的濃度為0.33μg/mL。

4.根據權利要求1所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，所述的多種氧化脂蛋白為氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白。

5.根據權利要求1所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，步驟2中所述的標準系列溶液為新鮮混合血清原液及其倍比稀釋溶液。

6.根據權利要求5所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，新鮮混合血清原液中氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白的含量由純化的Cu²⁺氧化的脂蛋白（a）和Cu²⁺氧化的低密度脂蛋白標定。

7.根據權利要求1所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，步驟2和3中所述的辣根過氧化物酶標記的抗體分別為辣根過氧化物酶標記的載脂蛋白（a）單克隆抗體和辣根過氧化物酶標記的載脂蛋白B多克隆抗體。

8.根據權利要求7所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，所述辣根過氧化物酶標記的載脂蛋白（a）單克隆抗體和辣根過氧化物酶標記的載脂蛋白B多克隆抗體的稀釋度均為1：100。

9.根據權利要求1所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，步驟1中封閉所使用的封閉液為含10%胎牛血清的0.01M磷酸鹽緩沖液，pH?7.4；步驟1、2、3中洗滌所使用的洗滌液均為pH?7.4，0.01M磷酸鹽緩沖液。

10.根據權利要求1所述的化學發光成像免疫分析方法，其特征在于，步驟2和步驟3中第一步溫育反應的時間為1h，第二步溫育反應的時間為1.5h。