[發(fā)明專(zhuān)利]一種馬屬動(dòng)物胚胎切割操作液配制方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310588186.2
• 申請(qǐng)日: 2013-11-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103756956A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張志鵬;張肖軍;馬玉萍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 青島德瑞駿發(fā)生物科技有限公司;伊犁德瑞駿發(fā)生物科技有限公司;青島德瑞鰲藍(lán)馬術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/073
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/073
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動(dòng)物胚胎移植領(lǐng)域，特別是涉及一種馬屬動(dòng)物胚胎切割操作液及其配制方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

胚胎分割技術(shù)（Embryo?bisection）是借助顯微操作技術(shù)或徒手操作方法切割早期胚胎成二、四等多等份再移植給受體母畜，從而獲得同卵雙胎或多胎的生物學(xué)新技術(shù)。來(lái)自同一胚胎的后代有相同的遺傳物質(zhì)，因此胚胎分割可看成動(dòng)物無(wú)性繁殖或克隆的方法之一。

胚胎分割操作液是用于獲取胚胎后進(jìn)行胚胎分割操作時(shí)營(yíng)養(yǎng)保護(hù)性液體。胚胎分割操作液多數(shù)為組織培養(yǎng)液，目前國(guó)內(nèi)常用的胚胎切割操作液主要有杜氏磷酸鹽緩沖液（D-PBS）、布林斯特氏液、合成輸卵管液（SOF）、惠屯氏液、Ham’s?F-110以及TCM-199。上述幾種液體均存在藥品來(lái)源困難，價(jià)格昂貴，配制步驟繁瑣且需現(xiàn)用現(xiàn)配等問(wèn)題，為胚胎移植的規(guī)?；a(chǎn)帶來(lái)極大的不便。

?發(fā)明內(nèi)容

為了解決傳統(tǒng)的胚胎分割操作液藥品來(lái)源困難、價(jià)格昂貴、配制步驟繁瑣且需現(xiàn)用現(xiàn)配等問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種適用于規(guī)?；a(chǎn)的馬屬動(dòng)物非手術(shù)法胚胎移植用胚胎切割操作液及其配制方法和應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種馬屬動(dòng)物胚胎分割操作液，所述胚胎切割操作液包括乳酸鈉混合液、青霉素、鏈霉素，以及牛血清白蛋白或犢牛血清或滅活馬血清中的一種、兩種或三種。

所述乳酸鈉混合液包括乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂和黃芪多糖中的一種或多種。

所述胚胎切割操作液中各組分的含量為：每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素30-180萬(wàn)單位、鏈霉素20-200萬(wàn)單位，以及牛血清白蛋白0.05%-1.5%、犢牛血清0.5%-15%和/或滅活馬血清0.5%-14%。其中，所述血清白蛋白、所述犢牛血清以及所述滅活馬血清的百分比為體積百分比。

所述胚胎分割操作液中各組分的含量為：每1000ml乳酸鈉混合液中含有青霉素50-150萬(wàn)單位、鏈霉素50-150萬(wàn)單位，以及牛血清白蛋白0.1%-0.9%、犢牛血清1%-10%和/或滅活馬血清1%-10%。其中，所述血清白蛋白、所述犢牛血清以及所述滅活馬血清的百分比為體積百分比。

所述乳酸鈉混合液中各組分的含量為：每1000ml混合液中含有乳酸鈉1-7g、氯化鈉1-5g、氯化鉀2-7g、氯化鈣0.5-2g、氯化鎂0.05-0.5g和黃芪多糖0.01-0.3g。

所述乳酸鈉混合液中各組分的含量?jī)?yōu)選為：每1000ml混合液中含有乳酸鈉3-7g、氯化鈉2-5g、氯化鉀3-7g、氯化鈣0.5-1.5g、氯化鎂0.1-0.4g和黃芪多糖0.01-0.1g。

所述乳酸鈉混合液中各組分的含量還可以?xún)?yōu)選為：每1000ml混合液中含有乳酸鈉5.4g、氯化鈉3.2g、氯化鉀4.6g、氯化鈣1.1g、氯化鎂0.32g和黃芪多糖0.08g。

為了更好的實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明還提供了一種馬屬動(dòng)物胚胎切割操作液的配制方法，包括：

（1）按照各組分的含量稱(chēng)取乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和氯化鎂，并加入蒸餾水混合，置于37℃的恒溫箱中0.5-6小時(shí)后，備用；

（2）稱(chēng)取黃芪多糖放入無(wú)菌燒杯中，向無(wú)菌燒杯中加入步驟（1）中得到的混合液，攪拌使黃芪多糖充分溶解，得到乳酸鈉混合液；

（3）胚胎分割操作前，按照組分含量向乳酸鈉混合液中加入青霉素、鏈霉素以及牛血清白蛋白、犢牛血清和滅活馬血清中的一種或兩種或三種，即可得到胚胎分割操作液。

本發(fā)明的馬屬動(dòng)物胚胎切割操作液適用于馬、牛、驢的非手術(shù)法胚胎移植技術(shù)。

?本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來(lái)的有益效果是：本發(fā)明以乳酸鈉混合液作為主液，可提前配制待用，使用前只需向主液中加入適量抗生素及牛血清白蛋白或犢牛血清或滅活馬血清即可。具有取材方便、價(jià)格低廉、配制簡(jiǎn)單、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，非常適用于馬屬動(dòng)物非手術(shù)法胚胎移植的規(guī)?；a(chǎn)，有利于胚胎移植技術(shù)的推廣應(yīng)用。

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具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。

?實(shí)施例1

一種馬屬動(dòng)物胚胎分割操作液，包括5000ml乳酸鈉混合液作為主液，每1000ml乳酸鈉混合液含有50萬(wàn)單位青霉素、50萬(wàn)單位鏈霉素和體積百分比為10%的犢牛血清。