[發明專利]一種新型卵黃抗體及其制備方法

在審

• 申請號: 201310584165.3
• 申請日: 2013-11-20
• 公開（公告）號: CN103613665A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于動保行業獸用生物制品領域，所提供卵黃抗體主要用于檢測、預防和治療多類禽流感病毒感染，以及因為毒株變異而引起的禽流感免疫失敗。

禽流感是禽流行性感冒的簡稱，是由A型流感病毒引起的禽類烈性傳染病，又?稱真性雞瘟或歐洲雞瘟。臨床主要表現為急性高致死性，產蛋量下降，輕度呼吸系統疾病等。禽流感是全世界范圍內的禽類傳染病，因對養禽業造成的毀滅性經濟損失，而被視為嚴重威脅家禽養殖業的頭號傳染病，100多年來人類尚未發現有效的預防和治療方法。禽流感還是一種禽畜和人共感病，對人類健康存在巨大威脅。

從2003年12月開始，由H5N1禽流感病毒引起的高致病性禽流感突襲亞洲，在不到2個月的時間內，席卷了韓國、日本、越南、泰國、柬埔寨、老撾、中國和印度尼西亞等?8?個東亞和南亞國家。此次禽流感流行的規模之大、地理分布范圍之廣、破壞程度之深在人類養禽業歷史上均是史無前例的。當前，禽流感在世界局部地區仍然活躍，疫情范圍里繼續擴?大之勢。據不完全統計，從?2003?年到現在，僅亞洲各國死亡或淘汰的禽只總數大約，15億只，全球已有超過1000?人感染禽流感，因患禽流感死亡的人數已接近700人。

當前，已開發出多種治療禽流感的藥物，并制定出許多可行防控方案，且取得顯著?效果。但禽流感病毒在傳染過程中，不斷發生變異，使許多之前的有效防控方案失效。本發明所提供的卵黃抗體含多種抗體，對多種禽流感毒株所引起的感染有效，可降低因為毒株變異而導致防控失敗的機率。

當前卵黃抗體提取純化方法有乙二醇提取法、氯仿提取法、鹽析法等，這些方法收率低、雜蛋白多、產品活性低。

發明內容

本發明旨在提供一種能有效防控禽流感的新型卵黃抗體以及精制生產工藝和用途。本發明采用提取純化方法，能最大限度將卵黃抗體從雜蛋白中分離出來，且純化濃縮過程不會對卵黃抗體產生破壞作用，不影響產品生物活性。

一種新型卵黃抗體及其制備方法，其生產過程如下：

1、挑選高品質蛋雞雞茵進行凈化飼養，為生產免疫蛋做準備；

2、產蛋期開始后，給蛋雞按一定程序人工免疫特定抗原因或H7、H9型禽流感弱化疫苗；

3、收集免疫雞蛋并保存，為提取卵黃抗體做準備；

4?、收集蛋黃按?1:10?的比例加入蒸餾水并攪拌?30?分鐘，配成均勻蛋黃液。調節蛋黃液?PH?值到?5.5，10℃?靜置14小時，回收上清液；

5、將含卵黃抗體的蛋黃土清液進行雙效超濾濃縮，收集卵黃抗體濃縮?將回收的卵黃土清液通過?0.45μm?和0.?22μm的串聯過濾系統過濾，再將過濾液以4.?5L/min?的流速經過截留分子量分別150KD?和?220KD的雙效超濾系統進行濃縮，待濃縮液體積為1/?20?時回收濃縮液；

6、將卵黃濃縮液進行冷凍干燥，制成凍干粉將回收的卵黃土清液通過??0.45μm和0.?22μm的串聯過濾系統過濾，再將過濾液以4.?5L/min的流速經過截留分子量分別為150KD?和220KD的雙效超濾系統進行濃縮，待濃縮液體積為1/?20時回收濃縮液；

7?、利用卵黃抗體凍干粉配制臨床適用的卵黃抗體制品?檢測卵黃濃縮液中抗體含量，分別按5.?5%、30%的含量加入普朗尼克、可溶性淀粉，混合均勻后無菌分裝到滅菌西林瓶，-?400C冷凍干燥，制成卵黃抗體凍干粉制劑。

本方法利用蛋白質的等電點特性，通過沉陣法將卵黃抗體與雜蛋白有效分離，且在純化濃縮過程中不破壞卵黃抗體的空間結構，充分保護了卵黃抗體的生物活性。所生產的卵黃抗體純度高、活性強。

本發明所提供的卵黃抗體含多種抗體，用于檢測、預防和治療多類禽流感病毒感?染，以及由毒株變異而引起的禽流感免疫失敗。

實施例

1：蛋雞的免疫

選擇健康蛋雞，在?170?日齡時進行首免H5、H7、H9型禽流感弱化疫苗，接種方式為胸肌多點注射。并分別在首免?14?天和?28?天時進行強化免疫。強化免疫后?7?天開始檢測免疫雞?蛋中卵黃抗體水平，合格后開始收集免疫雞蛋。

2：卵黃抗體的提取

使用蛋黃篩將蛋黃從免疫雞蛋中分離，按?1:10?的比例加入蒸餾水并攪拌?30?分鐘，配成?均勻蛋黃液。調節蛋黃液?PH?值到?5.0?，8?0C?靜置?12?小時，回收上清液。

3：卵黃抗體的純化