[發(fā)明專利]一種固定化脂肪酶的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310581545.1
• 申請(qǐng)日: 2013-11-19
• 公開（公告）號(hào): CN104651345A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 金雪
• 主分類號(hào): C12N11/10
• 分類號(hào): C12N11/10;C12N9/20
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種固定化脂肪酶的制備方法。

背景技術(shù)

脂肪酶可溶于水溶液中，但其天然底物如油脂卻不溶于水。雖然采用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑或乳化劑有助于酶與底物的結(jié)合，但脂肪酶在非均相反應(yīng)體系的實(shí)際利用中仍存在技術(shù)上的問題。例如反應(yīng)系統(tǒng)中殘存的酶可能對(duì)產(chǎn)物的質(zhì)量產(chǎn)生不利影響。另外游離酶的使用壽命相對(duì)較短，從而使成本增加。如果將脂肪酶固定化，使其在反應(yīng)體系中成為獨(dú)立相，便可通過機(jī)械手段固定于反應(yīng)器中，這樣就不會(huì)污染產(chǎn)物，使用壽命也大大延長。

生物柴油生產(chǎn)中固定脂肪酶的載體有大孔丙稀酞胺樹脂、蠶絲、凝膠、聚亞胺酯泡沫、生物質(zhì)顆粒等，但存在甘油易堵塞顆粒狀固定化酶的孔徑，產(chǎn)生固定化酶壽命縮短的問題。為制備高品質(zhì)、低成本的生物柴油，應(yīng)開發(fā)新型的脂肪酶固定化方法及載體，其中脂肪酶的膜固定化具有其他方法不可比擬的優(yōu)勢(shì)而備受關(guān)注。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種固定化脂肪酶的制備方法，采用價(jià)格低廉、活性高的游離脂肪酶Lipause?OF作為催化劑，解決催化劑易受醇作用而失活以及催化劑長期使用等問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

將一定量的LipaSe?OF和海藻酸鈉(濃度1％-3％)分別溶于磷酸緩沖液(pH值6.0-8.0)中，充分溶解，合并兩溶液，充分?jǐn)嚢?，混合均勻；用微量注射器逐滴滴入到氯化鈣溶液(0.02-0.15mol/L)中，室溫下固定20-60min；過濾，在35℃，真空度為0.09MPa的真空干燥箱中烘干。

本發(fā)明采用海藻酸鈉包埋法制得的固定化酶，具有較好的熱穩(wěn)定性，在60℃溫度下保持7h，其酶活力基本上不變。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

將一定量的Lipase?OF和海藻酸鈉(濃度2％)分別溶于磷酸緩沖液(pH值7.0)中，充分溶解，合并兩溶液，充分?jǐn)嚢瑁旌暇鶆?；用微量注射器逐滴滴入到氯化鈣溶液(0.05mol/L)中，室溫下固定30min；過濾，在35℃，真空度為0.09MPa的真空干燥箱中烘干。酶活達(dá)到1810U/g。

實(shí)施例2

將一定量的Lipase?OF和海藻酸鈉(濃度2％)分別溶于磷酸緩沖液(pH值7.5)中，充分溶解，合并兩溶液，充分?jǐn)嚢?，混合均勻；用微量注射器逐滴滴入到氯化鈣溶液(0.05mol/L)中，室溫下固定40min；過濾，在35℃，真空度為0.09MPa的真空干燥箱中烘干。酶活達(dá)到2300U/g。

以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其進(jìn)行限制，盡管參照上述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，依然可以對(duì)上述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換，而這些修改或替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明所要求的技術(shù)方案的精神和范圍。