[發(fā)明專(zhuān)利]用于孔雀石綠SPR檢測(cè)的膠體金放大分子印跡膜的制備

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310580918.3
• 申請(qǐng)日: 2013-11-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104634762A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高志賢;彭媛;白家磊;柳明;劉原瑗;孫思明
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/552
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/552
• 代理公司: 無(wú)
• 代理人: 無(wú)

1.一種在SPR傳感器芯片表面原位合成分子印跡薄膜的方法，其特征由以下步驟組成：

(1)向含有3.3g?TOAB的400ml甲苯溶液及200ml15mM的HAuCl₄·4H₂O水溶液的混合溶液中，緩慢滴入100ml含有655mg?MUA的甲苯溶液，劇烈攪拌。再向該混合液中逐滴加入新配制的NaBH₄水溶液(0.3M，100ml)，繼續(xù)攪拌1h。用去離子水沖洗并分離有機(jī)相，旋蒸去除有機(jī)相溶劑，所得殘留物真空干燥1天，得到的黑色固體以2℃／min的速度熱處理30min至155℃。所得產(chǎn)物溶于50ml的甲苯中，再將其逐滴加入800ml氯仿中，過(guò)濾去除過(guò)量的MUA和TOAB，得到膠體金，在室溫干燥后溶于200ml二甲基亞砜中。

(2)稱(chēng)取20mg引發(fā)劑和2mg粘附劑溶于1mL四氫呋喃中，混和均勻。取100μL混合液滴于SPR傳感器芯片表面，在勻膠臺(tái)上旋涂均勻；

(3)稱(chēng)取27mg孔雀石綠與一定比例的功能單體、交聯(lián)劑溶于3.5mL含有膠體金的二甲基亞砜中，制得預(yù)聚合液；(備注：功能單體包括甲基丙烯酸、N-異丙基丙烯酰胺、雙功能單體甲基丙烯酸與N-異丙基丙烯酰胺的摩爾比為(1：2)、雙功能單體甲基丙烯酸與N-異丙基丙烯酰胺的摩爾比為(2：1))

(4)將步驟(3)配置的預(yù)聚合液超聲除氣5min后，通氮?dú)獬?min。將旋涂了引發(fā)劑的SPR芯片浸入預(yù)聚合液中，繼續(xù)通氮5min，密封反應(yīng)容器，于真空干燥箱中60℃聚合16h。聚合完畢后將SPR芯片浸入甲醇：冰乙酸=9：1的混合溶液中洗脫模板分子6h。

2.一種基于分子印跡膜作為SPR傳感器識(shí)別元件的檢測(cè)孔雀石綠的方法，其特征由以下步驟組成：

(1)將表面聚合有分子印跡膜的芯片安裝至SPR傳感器(Autolab?ESPRIT，荷蘭)，用去離子水穩(wěn)定芯片表面，直至基線穩(wěn)定；

(2)以去離子水作為溶劑和載液，取50μL孔雀石綠溶液在芯片表面進(jìn)行吸附反應(yīng)600s，解吸附300s，測(cè)得該濃度孔雀石綠SPR響應(yīng)值。用含1mM?HCl、20％乙腈(V／V)的水溶液再生120s，洗脫吸附的孔雀石綠，以此循環(huán)對(duì)0.005-5μg／mL濃度范圍內(nèi)的孔雀石綠溶液進(jìn)行檢測(cè)；

(3)根據(jù)測(cè)得的SPR信號(hào)及相應(yīng)的孔雀石綠濃度，繪制含有膠體金的、以N-異丙基丙烯酰胺為功能單體的分子印跡膜對(duì)孔雀石綠的吸附響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線：在0.005-0.25μg／mL濃度范圍內(nèi)，y=0.05053x+2.90427，R20.99871；在0.5-5μg／mL的濃度范圍內(nèi)，y=0.02985x+25.96318，R2=0.99817。最低檢測(cè)限：0.005μg／mL，檢測(cè)時(shí)間小于20min。