[發(fā)明專利]基于熒光素酶標(biāo)記工程菌的氟喹諾酮類藥物殘留檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310578673.0
• 申請日: 2013-11-18
• 公開（公告）號: CN103592167A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁宗輝;董小冰;程古月;王玉蓮;彭大鵬;郝海紅;黃玲利;陶燕飛;陳冬梅;戴夢紅;王旭;謝書宇;潘源虎;劉振利;謝長清
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/64;G01N21/76;G01N33/50
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一種能夠識別氟喹諾酮類藥物的熒光素酶標(biāo)記的基因工程菌大腸桿菌(Esherichia?coli)pK12，其特征在于：該菌株保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC?NO：M2013385，它是由含有recA啟動子和熒光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒pRecAlux3轉(zhuǎn)化大腸桿菌K12所得。

2.一種基于熒光素酶標(biāo)記基因工程菌大腸桿菌pK12的同時(shí)對11種氟喹諾酮類藥物殘留的檢測方法，包括熒光素酶標(biāo)記基因工程菌大腸桿菌pK12的構(gòu)建和樣品前處理步驟，其特征在于還包括如下步驟：

(1)用質(zhì)粒pRecAlux3轉(zhuǎn)化大腸桿菌K12，得到重組的大腸桿菌(Esherichia?coli)pK12，其保藏號為CCTCC?NO：M2013385；

(2)分別取牛、雞、豬的肌肉、肝臟、腎臟及魚肉樣品用磷酸鹽緩沖液提取得上清液待測，新鮮牛奶樣品直接上樣檢測；

(3)將步驟(1)得到的重組的大腸桿菌(Esherichia?coli)pK12在含25μg/mL卡那霉素的LB肉湯培養(yǎng)基中于26℃，250rpm恒溫?fù)u床中培養(yǎng)至OD₆₀₀=1，得到新鮮菌液；

(4)將步驟(3)得到的新鮮菌液與步驟(2)得到的待測樣品在26℃靜置孵育60min，用多功能酶標(biāo)儀檢測熒光量；

(5)計(jì)算誘導(dǎo)系數(shù)值IC，其公式為：IC=Li/Lb-1

式中IC：誘導(dǎo)系數(shù)；Li：樣品的熒光強(qiáng)度；Lb：空白組織的熒光強(qiáng)度。

其中：

步驟(2)中的磷酸鹽緩沖液按如下方法配制：稱取0.523g?KH₂PO₄和16.73g?K₂HPO₄溶解于800mL蒸餾水中；調(diào)節(jié)pH值至8.0；定容至1L；在121℃高壓蒸汽下滅菌20min，備用。

3.權(quán)利要求1所述的大腸桿菌(Esherichia?coli)pK12在氟喹諾酮類藥物檢測方法中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求2所述的檢測方法在可食性動物產(chǎn)品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測中的應(yīng)用。