[發明專利]一種快速測定大觀霉素發酵液或成品中大觀霉素含量的方法

有效

• 申請號: 201310578040.X
• 申請日: 2013-11-18
• 公開（公告）號: CN103645151A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 王義;周麗娜
• 申請（專利權）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 寧夏專利服務中心 64100
• 代理人: 徐淑芬

技術領域

本發明涉及一種大觀霉素的檢測方法，特別是涉及一種快速測定大觀霉素發酵液或成品中大觀霉素含量的方法。

背景技術

大觀霉素又名壯觀霉素，是由壯觀鏈霉菌產生的廣譜抗生素，對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌有廣譜活性，對肺炎桿菌、流感桿菌、支原體均有較好的抑制作用，主要作用于淋球菌，是治療淋病的特效藥。其鹽酸鹽為白色或類白色結晶粉末。易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有機溶劑。在酸性條件下穩定，中性、堿性條件下不穩定。

大觀霉素極性較強，紫外最大吸收波長在190nm附近，屬于末端吸收區，加之結構較不穩定，容易降解，故大觀霉素的含量分析較為困難。目前鹽酸大觀霉素的檢測方法有以下幾種：管碟法（生物效價法）、萃取光度法、高效毛細管電泳法、高效液相法、高效液相色譜一蒸發光散射檢測法，氣相色譜法等。管碟法操作程序復雜繁瑣、測定周期長、工作量大、需要熟練精確操作，無法實現實時控制生產過程；萃取光度法過程較為復雜，操作較為繁瑣，生產中不易實現；高效毛細管電泳法設備成本較高；高效液相法需進行衍生化處理，衍生化反應操作復雜、耗時，且準確度受衍生物穩定性的影響大；高效液相色譜一蒸發光散射檢測法操作簡單，準確性、重現性好，但是該方法中需使用三氟醋酸水溶液作為流動相，會由于酸性過強，極大損傷并縮短色譜柱的使用壽命，成本較高，不適用于生產；氣相色譜法是目前國際上通行的鹽酸大觀霉素含量檢測方法，目前英國藥典和美國藥典鹽酸大觀霉素的測定均采用六甲基硅烷衍生化后用氫火焰離子檢測器(FID)檢測，但是該方法也需要進行衍生化處理，且不能檢測大觀霉素發酵液。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種快速測定大觀霉素發酵液或成品中大觀霉素含量的方法，該方法工藝簡單，測量誤差較小，準確度較好，精密度較高。

本發明根據大觀霉素的結構特性，通過試劑與檢測條件篩選，所采用的技術方案如下：

一種快速測定大觀霉素發酵液或成品中大觀霉素含量的方法，其特征在于采用紫外可見分光光度法，檢測波長為255nm，并以磷鎢酸為顯色體系。

所述采用紫外可見分光光度法測定的具體步驟為：

標準工作曲線的繪制：配置不同濃度的含有磷鎢酸的鹽酸大觀霉素標準溶液，靜置半小時后過濾，以蒸餾水為參比溶液，測定上述不同濃度標準溶液在255nm下的吸光度，然后以吸光度為縱坐標，對應標準溶液的濃度為橫坐標，繪制標準曲線；

測定方法：取待測大觀霉素發酵液或成品，加入磷鎢酸溶液，靜置半小時，稀釋定容過濾后作為測試液；以同樣處理的不加磷鎢酸溶液的待測大觀霉素成品為參比溶液，測定測試液在255nm下的吸光度；根據標準曲線，計算大觀霉素的濃度。

本發明采用紫外分光光度法測定大觀霉素發酵液或成品中大觀霉素的濃度，與現有技術相比，具有以下技術優勢：

（1）本發明的方法操作簡單，檢測方便，檢測時間短，僅需要十幾分鐘。

（2）本發明的方法不僅能檢測大觀霉素發酵液，也能檢測大觀霉素純品，其測定結果與高效液相色譜法測定的結果一致，可廣泛應用于大觀霉素含量的測定。

（3）本發明的方法不用進行衍生化處理即可實現，避免了衍生操作過程中的誤差，準確度高。

（4）本發明的方法專一性較強，成本較低，易于實現生產在線檢測。

附圖說明

圖1是用本發明方法所做的大觀霉素標準曲線。

具體實施方式

下面用實例予以說明本發明，應該理解的是，實例是用于說明本發明而不是對本發明的限制。本發明的范圍與核心內容依據權利要求書加以確定。

實施例1：檢測條件的選擇和方法驗證

1?試驗儀器與材料

試驗儀器：海能i8紫外可見分光光度計（濟南海能儀器股份有限公司）

材料：鹽酸大觀霉素標準品：由中國獸藥監察所提供，效價為638μ/mg；

大觀霉素發酵濾液；

磷鎢酸（天津凱通化學試劑有限公司）；

蒸餾水。

2?溶液的配制

磷鎢酸標準溶液（0.01g/L）：精確稱取1.0g磷鎢酸，溶解定容至100ml。

鹽酸大觀霉素標準液（1000μ/ml）：準確稱取0.1567g鹽酸大觀霉素標準品，溶解定容至100ml，置于冰箱保存。

大觀霉素發酵液：來自不同菌株，不同發酵時間。

3?最大吸收波長測定