[發(fā)明專利]一種膽鹽水解酶基因BSH及其重組原核表達載體在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310576384.7 | 申請日： | 2013-11-18 |
| 公開（公告）號： | CN104087606A | 公開（公告）日： | 2014-10-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李曉輝;包凌霞 | 申請（專利權(quán)）人： | 李曉輝 |
| 主分類號： | C12N15/55 | 分類號： | C12N15/55;C12N15/70;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 400038 重慶市沙坪壩*** | 國省代碼： | 重慶;85 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 鹽水 基因 bsh 及其 重組 表達 載體 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于基因技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種膽鹽水解酶基因BSH及其重組原核表達載體。
背景技術(shù)
膽鹽水解酶（bile?salt?hydrolase,BSH）是微生物生長、繁殖過程中產(chǎn)生的一種代謝產(chǎn)物。該酶能水解結(jié)合態(tài)牛磺酸膽鹽和甘氨酸膽鹽,最終將其轉(zhuǎn)變成氨基酸和游離膽酸，具有降低血清膽固醇的功能（KOCIUBINSKI?G,PEREZ?P,ANTONI?G.Screening?of?Bile?Resistance?and?Bile?Peicipitation?in?LacticAcid?Bacteria?and?Bifidobacteria[J].Food?Prot,1999,62:905～912；Coleman?JP,Hudson?LL.Cloning?and?characterization?of?a?conjugated?bile?acid?hydrolase?gene?fromClostridium?perfringens.Appl.Environ.Microbiol,1995,61:2518～2520.）BSH通常為胞內(nèi)酶，微酸環(huán)境下的最適pH值一般在5和6之間，對氧氣不敏感，該酶已經(jīng)從多種微生物中得到了分離和鑒定（李貴節(jié).降膽固醇乳桿菌的綜合評價及膽鹽水解酶活性研究.上海：上海交通大學.2008，2；牛治霞,劉恩梅.益生菌中膽鹽水解酶(BSHs)研究進展.中國乳品工業(yè),2007,35(9):35～40；BinderH.J,B.Filburn,M.Floch.Bileacidinhibition?of?intestinal?anaerobic?organism.Am.J.Clin.Nutr,1975,28(10):119～125；KIM?G?B,LEE?B?H.Biochemical?and?Molecular?Insights?Into?Bile?Salt?Hydrolase?in?the?Gastrointestinal?Microflora?a?Review?Asian-Aust[J].AnitaSci,2005,18:1505～1512）。目前，發(fā)現(xiàn)的產(chǎn)膽鹽水解酶的菌株都是革蘭氏陽性菌，其中包括部分的益生菌株，如:乳酸菌、雙歧桿菌等；另外一部分則是與宿主以共生的形式寄生于腸道中的菌株，如：類桿菌、梭狀芽孢桿菌、腸球菌等，通常生長在無膽鹽的環(huán)境中菌株產(chǎn)生的BSH酶均不具有活性。
迄今為止有關(guān)膽鹽水解酶的研究報道相對較少，國內(nèi)的研究主要集中在降膽固醇機理、高產(chǎn)BSH酶優(yōu)良菌株的篩選、BSH酶的純化等方面；而國外也則正在進行有關(guān)BSH酶微生物分子生物學等方面的研究，但還至今未見有突破性進展。
發(fā)明內(nèi)容
針對上述問題，本發(fā)明實施例的目的在于提供一種膽鹽水解酶基因BSH及其重組原核表達載體。
本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種膽鹽水解酶基因BSH，該膽鹽水解酶基因BSH保藏號為CGMCCＮｏ.6540，來自屎腸球菌含有的兩個BSH基因BSH1、BSH2，經(jīng)比對兩個序列相似性為68.10％。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種含有上述屎腸球菌膽鹽水解酶基因BSH1、BSH2的重組原核高效表達載體，其特征在于：所述重組原核表達載體是在pET-32a載體的多克隆位點中插入屎腸球菌膽鹽水解酶基因BSH1、BSH2而獲得；所述pET-32a載體表達量高，并帶有Trx.Tag，His.Tag,S.Tag。
本發(fā)明提供了一種屎腸球菌膽鹽水解酶基因BSH的兩個不同的序列，分別命名為基因BSHI、BSH2，經(jīng)比對兩個序列相似性為68.10％，具有如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，還公開了含有該基因的重組原核表達載體，實驗結(jié)果表明膽鹽水解酶基因在E.coli?BL21(DE3)宿主菌中進行了高效表達，也為研究出具有高效降解膽固醇的基因工程菌株提供了理論支持，同時為BSH基因在不同表達系統(tǒng)中的高效表達和表達調(diào)控的研究奠定基礎(chǔ)。
附圖說明
圖1為基因BSH1溫度梯度PCR擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳鑒定，1泳道為DL2,000DNA?Marker，2～9泳道依次為65℃，64.2℃，63℃，61.1℃，58.7℃，56.9℃,55.7℃,55℃溫度梯度擴增產(chǎn)物；
圖2為基因BSH2溫度梯度PCR擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳鑒定，1泳道為DL2,000DNA?Marker，2～9泳道依次為65℃，64.2℃，63℃，61.1℃，58.7℃，56.9℃,55.7℃,55℃溫度梯度擴增產(chǎn)物；
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于李曉輝，未經(jīng)李曉輝許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201310576384.7/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
