[發明專利]一種直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑及其制備方法

無效

• 申請號: 201310572308.9
• 申請日: 2013-11-15
• 公開（公告）號: CN103602617A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 陳衛軍;顏巧麗;鄧福明;王揮;趙松林
• 申請（專利權）人: 文昌中椰科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/04;C12R1/02
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司 46001
• 代理人: 劉清蓮

1.一種直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑的制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：

1）木葡萄糖酸醋桿菌菌泥

a、將先選育產細菌纖維素能力強的木葡萄糖醋酸桿菌，在120℃～130℃滅菌20～30分鐘后的活化培養基上活化接種；活化溫度20℃～60℃，活化時間24～62小時；

b、挑選單菌落在120℃～130℃滅菌20～30分鐘后的種子培養基中擴大細胞培養，培養溫度20℃～60℃，培養時間24～62小時；獲得木葡萄糖酸醋桿菌液體菌種；

c、將木葡萄糖酸醋桿菌液體菌種在4℃～8℃，以1000g～8000g離心速率，離心10～30分鐘,收集細胞，獲得木葡萄糖酸醋桿菌菌泥；

2）制備菌懸液

將步驟1）獲得的木葡萄糖酸醋桿菌菌泥用0.01～0.5mol/L，pH6.5～pH7.5的PBS緩沖液制備成菌懸液；

3）制備保護劑

將脫脂奶粉、海藻糖，蔗糖，乳糖，谷氨酸，甘氨酸，明膠，甘露醇分別用PBS緩沖液調制；脫脂奶粉、海藻糖，蔗糖，乳糖，谷氨酸，甘氨酸，明膠，甘露醇與PBS緩沖液的重量體積比分別為5～40%，5～20%，5～20%，5～20%，1～5%，1～5%，5～10%，1～5%；調制后獲得以下八種保護劑：脫脂乳5～40%，海藻糖5～20%，蔗糖5～20%，乳糖5～20%，谷氨酸1～5%，甘氨酸1～5%，明膠5～10%，甘露醇1～5%；

4）菌懸液與保護劑混均

a、將步驟2）的菌懸液與步驟3）的保護劑以1：2～5的體積比混勻，獲得菌懸液與保護劑的混合物；所述保護劑為脫脂乳5～40%，海藻糖5～20%，蔗糖5～20%，乳糖5～20%，谷氨酸1～5%，甘氨酸1～5%，明膠5～10%，甘露醇1～5%的一種或幾種混合；

b、將菌懸液與保護劑的混合物放4℃～5℃冰箱1～2小時；

5）冷凍干燥

a、將步驟4）獲得的菌懸液與保護劑的混合物放-18～-55℃低溫冰箱冷凍2～12小時直至完全凍結;獲得木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑樣品；

b、將木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑樣品用凍干機冷凍干燥，真空度為0.2MPa以下，干燥時間24～48小時，獲得直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑。

2.如權利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑的制備方法，其特征在于：所述活化培養基含有(NH₄)₂SO₄，MgSO₄、瓊脂，以自然發酵2天的椰子水，蒸餾水，pH5.0的固體培養基；該固體培養基中液體由椰子水和蒸餾水組成，椰子水與蒸餾水體積比為9：1;所述(NH₄)₂SO₄，MgSO₄、瓊脂與該固體培養基中液體的重量體積比分別為0.2%,0.05%，2%。

3.如權利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑的制備方法，其特征在于：所述種子培養基含有蔗糖，(NH₄)₂SO₄，KH₂PO₄，MgSO₄，自然發酵5～7天的椰子水，pH4.0的液體培養基；所述該液體培養基中液體由椰子水構成；蔗糖，(NH₄)₂SO₄，KH₂PO₄，MgSO₄與椰子水的重量體積比分別為5%，0.3%，0.2%，0.05%。

4.如權利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑的制備方法，其特征在于：所述種子培養基的培養溫度為30℃，培養時間為30小時。

5.如權利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑的制備方法，其特征在于：所述木葡萄糖酸醋桿菌液體菌種在4℃，以7000g離心速率，離心10分鐘。

6.如權利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑的制備方法，其特征在于：所述PBS緩沖液的濃度為0.01～0.5mol/L；pH為6.5～pH7.5。

7.如權利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋桿菌發酵劑的制備方法，其特征在于：所述保護劑為脫脂乳10%，谷氨酸1%的一種或兩種。