[發明專利]一種用于防治蘋果樹腐爛病的糖絲菌及其制備方法

無效

• 申請號: 201310571781.5
• 申請日: 2013-11-13
• 公開（公告）號: CN103667116A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 黃麗麗;顏霞;高小寧;涂璇;李正鵬;康振生
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/06;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/01
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明涉及生物農藥技術領域，具體涉及一種糖絲菌、其微生物制劑以及將其應用于防治蘋果樹腐爛病的病害。

背景技術

由于化學農藥的長期使用，使植物病害存在對殺菌劑的適應性變異，在某些殺菌劑的長期選擇壓力下，可以產生明顯的抗藥性，從而導致化學防治的失敗。生產中應綜合地考慮不同殺菌劑的應用策略，以充分發揮各種殺菌劑的作用，盡量避免抗藥性的產生。放線菌是一種常見的拮抗微生物，有助于開發和利用這類微生物資源。放線菌與人類的生產和生活關系極為密切，目前廣泛應用的抗生素約70%是各種放線菌所產生。內生放線菌指存在于健康植物體內,產生系列活性物質并能與宿主植物共同生活的放線菌。它們的代謝活動及產物可促進宿主植物適應外界各種(生物、非生物)環境壓力,維持生態系平衡。

蘋果是我國的重要經濟作物和出口水果，栽培面積和產量均居世界首位。然而，病害卻嚴重制約著我國蘋果產業的發展，特別是蘋果樹腐爛病在我國分布廣、危害重、防治難，果農將其稱之為蘋果樹“癌癥”。

目前蘋果樹腐爛病的防治方法主要有物理防治和化學防治。化學農藥的大量使用造成嚴重的環境污染，農產品的農藥殘留，病菌抗藥性、耐藥性。這些問題已對人們的生活產生了嚴重影響，而生物防治可以最大限度地減少化學農藥的用量，以改善生態環境。農用抗生素作為生物農藥中的重要類群，較其它生物農藥具有更高效、快速、安全等優點，且均在農作物病蟲害防治工作中發揮著重要作用。

但是，目前我國生物農藥的市場占有率僅有2％～3％，其潛力遠沒有得到充分的開發和應用。目前國內尚無利用拮抗菌防治蘋果樹腐爛病的生防制劑。

發明內容

鑒于現有技術的不足，本發明的目的旨在于探尋生物農藥的新來源，利用內生微生物資源而開發一種可以用于蘋果樹腐爛病害防治的高效、可產業化生產的生防菌菌株。本發明提供了一種楊凌糖絲菌（Saccharothrix?yanglingensis）Hhs.015菌株以及該菌株的篩選、鑒定方法；進一步地，提供該菌株發酵工藝及抗菌活性物質制備工藝，以及提供該菌株抗菌活性物質防治蘋果樹腐爛病的應用。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

本發明所述的楊凌糖絲菌（Saccharothrix?yanglingensis）Hhs.015菌株分離自溫室大棚內黃瓜根部組織中，經形態特征、培養特性、生理生化特性、細胞壁組分分析和16S?rDNA同源性序列分析，確定該菌株為楊凌糖絲菌（Saccharothrix?yanglingensis）Hhs.015。具有以下特征：

1、菌株在高氏一號培養基上基內菌絲杏黃色，氣生菌絲淺粉色，不產生可溶性色素；

2、基生菌絲細長，舒展，發達；多分枝，無隔。氣生菌絲細密柔曲，頂部螺旋狀，生長不旺盛，易斷裂。培養后期，氣生菌絲成熟，分化成孢子鏈，少螺旋，松散；

3、生理生化反應表現為：不能使牛奶凝固，也不能胨化，可使石蕊牛奶變紅；可水解淀粉；產卵磷脂酶；不產生硫化氫；產生黑色素；不能使明膠水解；產生纖維素酶；能還原硝酸鹽。生長溫度15～37℃，最適生長溫度為28℃；能利用糊精、葡萄糖、蔗糖、D-果糖、半乳糖、麥芽糖、甘油、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、肌醇、木糖、山梨醇；不能利用甘露糖、馬尿酸鈉、棉子糖。能以甘氨酸、丙氨酸、色氨酸為氮源；不能利用賴氨酸、L-半胱氨酸、胱氨酸、瓜氨酸、尿素、D,L-酪氨酸、天門冬氨酸；

4、16S?rDNA序列分析結果在GeneBank中進行最大同源性比較，發現16S?rDNA測序結果與糖絲菌屬16s?rDNA序列同源性最大達到99%。

本發明所述的楊凌糖絲菌（Saccharothrix?yanglingensis）Hhs.015已于2009年04月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC?No.3023。保藏期限30年，30年內免費提供活菌。

本發明所制備的微生物制劑含有保藏編號為CGMCC?No.3023的楊凌糖絲菌（Saccharothrix?yanglingensis）Hhs.015的代謝產物。

制備具有保藏編號為CGMCC?No.3023的楊凌糖絲菌（Saccharothrix?yanglingensis）Hhs.015的微生物制劑方法如下：