[發明專利]一種離子誘導制備柞蠶絲素蛋白納米顆粒的方法

有效

• 申請號: 201310568651.6
• 申請日: 2013-11-15
• 公開（公告）號: CN103554520A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 盧神州;王娟;邢鐵玲
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C08J3/00
• 分類號: C08J3/00;C08J3/24;C08L89/00;A61K47/42
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

技術領域

本發明涉及一種有機高分子微球的制備方法，特別涉及一種用柞蠶絲素蛋白為原料制備納米微球，屬生物醫學材料技術領域。

背景技術

近年來，隨著生物技術和基因工程的發展，越來越多的生物活性物質如蛋白質、酶有望用于疾病治療。由于蛋白質、多肽類藥物口服后在腸道中易降解，?靜脈注射體內循環時間短、生物半衰期短，大大制約了其應用。因此，如何將藥物精確有效地投遞到需要施治的部位，使藥效得以最大化發揮是醫學領域面臨的問題。為解決這些問題，出現了各種蛋白質類藥物劑型，其中微球制劑一直是近些年來藥劑學研究的熱點。它作為一種精密而細小的工具，可以廣泛用于生物醫學測量，藥物或化妝品傳送，微流體采樣等領域，它不僅具備傳統藥物載體的分散、保護功能，又有緩釋作用，作為當前新型藥物載體具有廣闊的開發和應用前景。近年來，天然生物高分子材料由于其獨特的生物相容性而頗受人們的關注其優點是以生物可降解材料制備微球為載體，將生物活性物質固定化后，轉運到特定部位，以預定的速率和劑量發揮作用。絲素蛋白來源豐富，制取簡單方便、無毒、無害、無刺激、無免疫原性，具有良好的物理、化學、生物學性能，與人體有較好的組織相容性。

柞蠶絲素蛋白是由柞蠶絲腺內壁上的內皮細胞分泌的高純度蛋白質，其氨基酸組成中以甘氨酸、丙氨酸和絲氨酸為主，具有良好的生物相容性，其本身及其降解產物對細胞和機體無毒，不會或較少引起炎癥和免疫排斥反應。特別是其蛋白質分子中含有的RGD三肽序列。RGD序列作為細胞膜整合素受體與細胞外配體相結合的識別位點，介導細胞與細胞外基質及細胞之間的相互作用，能夠促進細胞對于微球的識別，提高藥物的靶向性、提高藥物的生物利用度。將柞蠶絲素蛋白制備成微球用以生物活性物質的裝載，緩釋給藥前景廣闊。

本發明作出之前，文獻“安徽農業大學學報,?2005,?32(?2):?243~?245”介紹了一種柞蠶絲素粉的制取方法，以飽和硫酸銨溶液進行鹽析使絲素沉淀獲得柞蠶絲素粉，這種粉末顆粒大，形狀不規則，難以用于藥物釋放領域。公開號為CN1560136的中國發明專利中，公開了一種納米絲素顆粒的制造方法，通過向絲素蛋白溶液中加入甲醇、乙醇等變性劑，使絲素蛋白變性沉淀，得到納米絲素蛋白微球，但是有機溶劑的殘留會造成蛋白顆粒活性以及生物相容性的損失。文獻文獻“Biomaterials,?31?(2010)?1025–1035”利用PVA/絲素相分離技術制備幾百納米到幾十微米的絲素蛋白微球，需要溶解去除PVA，并且是用于家蠶絲素蛋白微球的制備。由于家蠶絲素蛋白氨基酸序列中不含有RGD三肽序列，因此對于細胞識別以及靶向性方面不足。公開號為CN102977381A?的中國發明專利中，公開了一種柞蠶絲素蛋白微球及其制備方法，采用自組裝原位生成法，通過控制pH值的方法獲得了柞蠶絲素蛋白微球。該方法需要調節pH值至酸性，將會對某些藥物分子產生影響，另外制備的顆粒略大，在微米級別，應用受到了一定的限制。

發明內容

為了克服現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一種離子誘導柞蠶絲素蛋白形成納米顆粒的制備方法，其制備過程溫和，得到的微球粒徑分布均勻，尺寸達到納米級別。

本發明采用的技術方案是：一種離子誘導制備柞蠶絲素蛋白納米顆粒的方法，包括如下步驟：以天然柞蠶絲素蛋白為原料，將柞蠶絲進行脫膠、溶解、透析處理后得到柞蠶絲素蛋白溶液，調節柞蠶絲素蛋白溶液濃度為5～50mg/mL；在溫度為30～60℃的條件下，加入濃度為0.01～1000mmol/L的陽離子進行誘導處理10～60分鐘，再在超聲波震蕩條件下進行陳化處理20～30分鐘，得到柞蠶絲素蛋白納米顆粒懸濁液；經離心分離、冷凍干燥處理，得到直徑為10～400納米的柞蠶絲素蛋白納米顆粒。

本發明所述的陽離子為一價離子中的鋰離子、鈉離子、鉀離子、季銨陽離子；或為二價離子中的鈣離子、鎂離子、錳離子、鋅離子、鎳離子、銅離子；或為三價離子中的鋁離子、鐵離子、鈰離子。

本發明的技術方案還包括按如上所述制備方法得到的柞蠶絲素蛋白納米顆粒。