[發明專利]一種規模化培養發狀念珠藻細胞的方法

無效

• 申請號: 201310561422.1
• 申請日: 2013-11-12
• 公開（公告）號: CN103710280A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 賈士儒;肖玉朋;戴玉杰;鄭行;呂和鑫;岳利芳;李清亮;韓培培;譚之磊
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

1.一種規模化培養發狀念珠藻細胞的方法，其特征在于：步驟如下

⑴培養發狀念珠藻種子液；

⑵將培養的發狀念珠藻種子液按體積比1:1到1:3接種至戶外光生物反應器中；

⑶戶外光生物反應器按比例為1:1—1:5進行放大培養，最終采收。

2.根據權利要求書1所述的規模化培養發狀念珠藻細胞的方法，其特征在于：所述培養基配方為：無水氯化鈣0.02-0.03g/L；七水硫酸鎂0.8-1.0g/L；硝酸鈉1.0-1.5g/L；七水硫酸亞鐵0.005-0.01g/L；九水硅酸鈉0.5-0.6g/L；磷酸二氫鉀0.1-0.2g/L；碳酸氫鈉0.5-2.0g/L；EDTA二鈉0.01-0.02g/L。

3.根據權利要求書2所述的規模化培養發狀念珠藻細胞的方法，其特征在于：所述培養基用水為經膜過濾的地下井水。

4.根據權利要求書1所述的規模化培養發狀念珠藻細胞的方法，其特征在于：所述分階段培養的步驟如下：

第一階段：藻種室內罐徑為30cm，高120cm的氣升式光生物反應器，外置光源，光照強度3000lux，25℃，接種密度10%條件下培養發狀念珠藻細胞60L，經過培養至密度為OD4200.8；

第二階段：將在藻種室內培養的發狀念珠藻細胞濃縮收集后接種到戶外自然光下，管徑為的150L管式光生物反應器中補充培養基繼續培養，控制溫度≤30℃，光照強度控制在40000lux以下，通過二氧化碳在線控制儀控制pH為8.0-9.0，經培養，培養濃度至OD420值0.9；

第三階段：將150L管式光生物反應器中培養的發狀念珠藻藻液轉移到戶外管徑為的500L管式光生物反應器中，同時補加150L培養時1/3的營養鹽，控制溫度≤30℃，光照強度控制在60000lux以下，通過二氧化碳在線控制儀控制pH為8.0-9.0，經培養至細胞濃度為OD420值0.9；

第四階段：將500L管式光生物反應器中培養的發狀念珠藻藻液轉移到戶外管徑為的1000L管式光生物反應器中，同時補加500L培養時1/3的營養鹽，控制溫度≤30℃，光照強度控制在80000lux以下，補充培養基，通過二氧化碳在線控制儀控制pH為8.0-9.0，經培養至細胞濃度為OD420值0.9；

第五階段：將1000L管式光生物反應器中培養的發狀念珠藻藻液轉移至沉淀池進行沉淀去掉上清液，藻泥洗滌2～3次，對洗滌完畢的藻泥收集進行噴霧干燥，收集藻粉；

所述步驟一至步驟五采用的培養基為：無水氯化鈣，0.027g/L；七水硫酸鎂0.8g/L；硝酸鈉1.5g/L；七水硫酸亞鐵0.01g/L；九水硅酸鈉0.6g/L；磷酸二氫鉀0.15g/L；碳酸氫鈉1.0g/L；EDTA二鈉0.02g/L。

5.根據權利要求4所述的規模化培養發狀念珠藻細胞的方法，其特征在于：所述培養液中通入食品級二氧化碳調節其pH值，使其維持發狀念珠藻生長的pH值為8.0-9.0。