[發明專利]水仙BES-SSR標記引物CATACA5及鑒定水仙品種的方法

有效

• 申請號: 201310560714.3
• 申請日: 2013-11-13
• 公開（公告）號: CN103589798A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 潘東明;祁世明;郭志雄;林琳;潘騰飛
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種水仙BES-SSR標記引物CATACA5，由上游引物CATACA5F和下游引物CATACA5R組成，其特征在于核苷酸序列如下：

CATACA5?F:?5'-GACATTTCCATTTACGTGTCTG

CATACA5?R:?5'-AGAAAACATCAGGTCTCAACT。

2.利用如權利要求1所述的水仙BES-SSR標記引物CATACA5鑒定水仙品種的方法，包括水仙基因組總DNA提取、PCR總反應體系建立、PCR擴增程序、聚丙烯酰胺凝膠電泳條件和PCR擴增產物的檢測鑒定，其特征在于：

（1）水仙基因組總DNA提?。豪酶牧嫉腃TAB法提取水仙基因組總DNA；

（2）PCR總反應體系建立：總反應體系20ul：供鑒定的水仙基因組總DNA?50ng，10×PCR?Buffer?2ul，10mmol/L?dNTPs?0.5ul，10mmol/L水仙CATACA5上下游引物各1.0ul，5U/L?Taq?DNA聚合酶?0.2ul，無菌ddH₂O?12.8ul；所述供鑒定的水仙，本發明共提供24份水仙品種樣品；

（3）PCR擴增程序：94℃預變性4min，94℃變性30s，52℃退火30s，72℃?延伸45s，共35個循環，72℃延伸10min，4℃保存；

（4）聚丙烯酰胺凝膠電泳條件：1×TBE電泳緩沖液，體積比為8%的聚丙烯酰胺凝膠，在電壓400V，電流100mA下電泳3.0h后用銀染法染色，經ImageScanner?Ⅲ凝膠掃描儀掃描保存；

（5）PCR擴增產物的檢測鑒定：利用水仙BES-SSR標記引物CATACA5，對24份水仙的樣品進行品種鑒定，于聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測的PCR擴增圖譜中，在分子量為122bp的位置出現DNA條帶，則該品種為中國多花水仙金盞銀臺；在分子量為109bp的位置出現DNA條帶，則該品種為中國多花水仙重瓣玉玲瓏；在分子量為234bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋重瓣水仙Replete；在分子量為122bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋小冠水仙Alltruist；在分子量為112bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋多花水仙Jetfire；在分子量為129bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋重瓣水仙Tahiti；在分子量為262bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋裂冠水仙Orangerie；在分子量為168bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋重瓣水仙Yellow?Cheerfulness；在分子量為114bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋紅口水仙Recurvus；在分子量為254bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋多花水仙Erlicheer；在分子量為277bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋三蕊水仙Thalia；在分子量為173bp?的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋喇叭水仙Mount?Hood；在分子量為98bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋多花水仙White?Favourite；在分子量為146bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋長壽花水仙Silver?Smiles；在分子量為261bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋大冠水仙Pink?Charm；在分子量為164bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋大冠水仙Johann?Strauss；在分子量為115bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋小冠水仙Barret?Browning；在分子量為244bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋喇叭水仙Dutch?Master；在分子量為108bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋大冠水仙Fortissimo；在分子量為222bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋大冠水仙Daydream；在分子量為174bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋重瓣水仙Gay?Tabor；在分子量為122bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋仙客來水仙Tete-a-Tete；在分子量為253bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋大冠水仙Bella?Vista；在分子量為281bp的位置出現DNA條帶，則該品種為西洋大冠水仙Carlton。