[發明專利]一種重組胰蛋白酶純化方法

有效

• 申請號: 201310557286.9
• 申請日: 2013-11-11
• 公開（公告）號: CN103805584A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 高相雷;陳小鋒;李利佳;林樹珊;張鴻;徐軍
• 申請（專利權）人: 宜昌長江藥業有限公司
• 主分類號: C12N9/76
• 分類號: C12N9/76;C12N15/81;C12R1/84
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

1.一種重組胰蛋白酶的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：獲得含有重組胰蛋白酶原的發酵液；

步驟2：取所述含有重組胰蛋白酶原的發酵液，分離得到上清液，活化，獲得含有重組胰蛋白酶的溶液；

步驟3：取所述含有重組胰蛋白酶的溶液，經純化、干燥，即得。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中所述活化具體為：取所述上清液，加入CaCl₂并調節pH至7.0～8.5，室溫下活化8小時～24小時。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述CaCl₂在所述重組胰蛋白酶的溶液中的終濃度為10mmol/L～100mmol/L。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3中所述純化包括大孔吸附樹脂層析和陽離子交換層析的步驟。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂層析采用的的填料為Rohmhaas?XAD4、Rohmhaas?XAD1180、Rohmhaas?XAD16或Rohmhaas?XAD7HP。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂層析采用的洗脫液為乙醇、乙酸和水的混合液。

7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述陽離子交換層析采用的填料為：GE?SP-sepharose?ff、GE?SP-sepharose?HP、GE?SP-sepharose?XL、GE?SP-sephadex?C-25、GE?SP-sephadex?C-50、tosoh?SP550、Bio-Rad?UNOsphere?s、Bio-Rad?rapid?s或Bio-Rad?high?s。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述陽離子交換層析采用的洗脫液為乙酸和NaCl的水溶液。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1具體為：

步驟a：獲得的編碼胰蛋白酶原基因；

步驟b：取所述編碼胰蛋白酶原基因，構建重組質粒；

步驟c：取所述重組質粒，構建重組畢赤酵母菌株；

步驟d：取所述重組畢赤酵母菌株，對重組胰蛋白酶原誘導表達，獲得所述含有重組胰蛋白酶原的酵母發酵液。