[發明專利]小鼠去勢高鐵骨質疏松模型構建方法

無效

• 申請號: 201310556517.4
• 申請日: 2013-11-11
• 公開（公告）號: CN103636555A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 王嘯;徐又佳;劉祿林;李光飛;高超
• 申請（專利權）人: 徐又佳
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61D1/06
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 范晴

技術領域

本發明涉及醫學技術領域，具體涉及動物實驗模型的構建方法，尤其涉及小鼠去勢高鐵骨質疏松模型構建方法。

背景技術

鐵元素在機體內的吸收過程相當復雜，食物中的三價鐵在小腸中由腸細胞色素B（Dcytb）還原為二價鐵，再通過二價陽離子轉運蛋白1（DMT1）轉運至小腸絨毛上皮細胞內，此時二價鐵可在細胞基底部經由膜鐵轉運蛋白1（FPN1）轉運至血液中，同時由膜鐵轉運輔助蛋白（Hp）氧化為三價，與血液中轉鐵蛋白結合。該結合的復合體隨血液運至各組織器官，并與組織內的細胞作用，由胞內steap3還原為二價鐵發揮其生物效應。近年來越來越多的研究顯示鐵代謝與骨代謝之間有著密切的關系，2010年美國Huang申請了鐵調素作為骨質疏松治療藥物的專利，并于2012年在Endocrinology和Gene上報道鐵在離體環境中對骨代謝的影響；不僅在基礎研究，臨床研究也顯示鐵代謝與骨代謝的關聯，2012年，韓國一項回顧性隊列研究中，針對健康體檢的940名絕經女性進行了為期三年的隨訪，發現在正常人群當血清鐵蛋白水平升高時，骨量呈劑量一致性的丟失加速。這項研究結論表明鐵蓄積可能是骨質疏松的獨立危險因素，該研究發表在骨質疏松一區雜志JBMR上，并被Nature評論為新的亮點。

骨質疏松在絕經女性群體高發，據統計，女性高于50歲后有約50%將發生骨質疏松。在女性，體內鐵離子平衡的一個重要“降鐵途徑”是月經排血，從45歲圍絕經期開始到60歲絕經后，當隨著雌激素減少、月經逐漸停止，宮血排出也減少，這段期間鐵蛋白水平升高約2～3倍。我們團隊在2012年和2013年分別在骨質疏松2區雜志IOF與Bone上提及鐵對骨質疏松的促進作用，因此女性絕經后骨質疏松除了與雌激素減少有關，還可能與體內鐵水平升高有關系。

臨床資料顯示，多數患有骨質疏松疾病的絕經婦女體內鐵水平偏高，其原因主要在于絕經后，女性不再有月經血排出體外，而月經血的排出又恰恰是鐵排泄的重要途徑，這就導致體內鐵失衡，排出減少導致鐵蓄積。大量文獻報道：雌性小鼠去除卵巢后，與假手術組相比，去勢組血清鐵、脛骨鐵含量平均值低于假手術組。這說明小鼠與人不一樣，由于小鼠本來就沒有月經，單純的去勢骨質疏松模型體內鐵并不增高。所以傳統的小鼠去勢骨質疏松模型不能貼切的反應絕經后婦女的高鐵狀態。其他骨質疏松模型也不理想，如比格犬，盡管有排經，但是頻次為2次/年，經血太少，去勢停經后對體內鐵水平影響不大；再如食蟹猴，排經情況最接近人類，但是去勢停經后造成高鐵狀態需時太長，要一年及以上，性價比不高。高鐵水平是骨質疏松癥的獨立危險因素，而傳統去勢模型不能很好的反應該危險因素。

發明內容

本發明所要解決的技術問題于克服上述現有技術的缺點，提供一種成本低，見效快，模型性能穩定，適用性廣的小鼠去勢高鐵骨質疏松模型構建方法。

為達到上述目的，本發明的技術方案是：小鼠去勢高鐵骨質疏松模型構建方法，包括以下步驟：

（1）用水合氯醛腹腔注射小鼠進行麻醉，切開腹腔找出雙側卵巢，在輸卵管上結扎，并徹底切除卵巢，最后縫合；

（2）術后1周，對小鼠腹腔注射枸櫞酸鐵銨（FAC），劑量為0.05g/kg，每周2次，飼養7周后得到小鼠去勢高鐵骨質疏松模型。

本發明的一優選技術方案，步驟（1）后小鼠肌注青霉素5萬U/d，持續3d，預防感染。

本發明的一優選技術方案，步驟（1）中用3.6%水合氯醛（10ml/kg）腹腔內注射麻醉。

本發明中相關術語的說明及解釋

根據本發明，術語“去勢”是指雙側卵巢切除。

根據本發明，術語“骨質疏松”是指是骨代謝過程中骨吸收和骨形成的偶聯出現缺陷，體內的鈣磷代謝不平衡，使骨密度逐漸減少而引起的癥狀。