[發明專利]一種擬小葉喇叭藻假根外植體的消毒方法

無效

• 申請號: 201310555178.8
• 申請日: 2013-11-11
• 公開（公告）號: CN103651118A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 蘇建麗
• 申請（專利權）人: 青島文創科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙) 11316
• 代理人: 滑春生;趙永偉

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術消毒領域，具體涉及一種擬小葉喇叭藻假根外植體的消毒方法。

背景技術

擬小葉喇叭藻（Turbinaria?conoides）隸屬于褐藻門、墨角藻目、馬尾藻科、喇叭藻屬，是我國常見的一種大型褐藻。擬小葉喇叭藻中含有豐富的海洋甾體化合物如海洋甾醇，海洋甾醇與陸生植物的甾醇相比，具有更為豐富的骨架和支鏈，這種獨特的結構賦予它具有抗腫瘤、抗病毒、消炎殺菌的特殊功效，且可以用來制備酶抑制劑，因此，海洋甾體化合物成為醫療與制藥業中引人矚目的一類成分。

目前，擬小葉喇叭藻主要以野生資源為主，但是野生資源也不豐富；人工栽培技術還不成熟，限制人工育種的主要因素是種藻來源不穩定、種質資源匱乏。植物組織培養技術可以快速繁殖，周年生產，不受季節限制；種苗整齊度高，可以進行新品種培育，所需材料較少，繁殖系數大，可以在一年內由一個莖段培養出數百萬種苗。

海洋植物的組織培養技術比較落后，究其主要原因是無法獲得大量無菌且可行的外植體，海藻主要是由細胞組成，雖然大型海藻的結構相對復雜，但是消毒劑的種類和劑量對外植體的影響非常顯著，劑量高容易殺死外植體，而劑量低又不容易殺死進入到海藻細胞內部的細菌或真菌。

發明內容

針對現有技術存在的缺陷，本發明所要解決的技術問題是提供一種擬小葉喇叭藻假根外植體的消毒方法，為擬小葉喇叭藻組織培養技術的研究提高充足的無菌可用的外植體。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案如下：

一種擬小葉喇叭藻假根外植體的消毒方法：海邊采集擬小葉喇叭藻后，用海水清洗干凈于冰盒中運至操作室，將擬小葉喇叭藻的葉狀體去除留取假根作為組織培養用的外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為1～5%的抗生素中浸泡5～8h，然后再將外植體取出，于碘化鉀溶液中浸泡2～5min，再將外植體取出，于聚維酮碘中消毒1～3min，最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈。

優選的，所述的抗生素為青霉素、鏈霉素、土霉素中的任意一種。

優選的，所述的碘化鉀濃度為0.5～1%。

優選的，所述的聚維酮碘的濃度為1～5%。

將上述假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段并接種到液體PES培養液中，每個培養瓶中接種1個切段，搖床培養，搖床的速度為100r/min，培養條件為光強5000Lx、光照時間12h、溫度18℃，培養2-3周后檢測外植體的無菌性和可行性。

本發明的有益效果是：減少抗生素的使用濃度和使用時間，避免外植體形成抗藥性；同時結合碘化鉀和聚維酮碘的消毒效果，既可以殺死外植體表面和內部的細菌或真菌，又可以避免消毒劑對外植體造成不可恢復的傷害，經本發明方法，可以獲得85%無菌、可行的假根外植體。

具體實施方式

以下通過實施例進一步闡述本發明的有益效果：

實施例1：

海邊采集擬小葉喇叭藻后，用海水清洗干凈于冰盒中運至操作室，將擬小葉喇叭藻的葉狀體去除留取假根作為組織培養用的外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為1%的青霉素中浸泡5h，然后再將外植體取出，于濃度為0.5%的碘化鉀溶液中浸泡2min，再將外植體取出，于濃度為1%的聚維酮碘中消毒1min，最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈；將上述假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段并接種到液體PES培養液中，每個培養瓶中接種1個切段，搖床培養，搖床的速度為100r/min，培養條件為光強5000Lx、光照時間12h、溫度18℃，培養2周后檢測外植體的無菌性和可行性；共接種40瓶，其中，25塊切段表面有絲狀體形成，無菌率為62.5%，而有10塊切段被污染表面形成細菌菌落，有5塊切段無變化。

實施例2：