[發(fā)明專利]小鼠肝臟前體細(xì)胞的生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310553216.6
• 申請日: 2013-11-08
• 公開（公告）號: CN103589681A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 安威;孫廣永;董凌月
• 申請（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京戈程知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

1.一種肝臟前體細(xì)胞的生產(chǎn)方法，包括步驟：

1）從小鼠胚胎中分離肝臟；

2）獲得肝臟的細(xì)胞懸液；

3）將細(xì)胞在小鼠成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上進行傳代培養(yǎng)，獲得單克隆；

4）將單克隆在明膠上進行傳代培養(yǎng)；

5）獲得肝臟前體細(xì)胞；

其中，所述小鼠胚胎的胎齡為13至15天。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝臟前體細(xì)胞的生產(chǎn)方法，其中小鼠胚胎的胎齡為13.5天。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝臟前體細(xì)胞的生產(chǎn)方法，其中所述小鼠為妊娠期為19-21天的小鼠，優(yōu)選所述小鼠選自：AKR、A/HeN、AL771、B10、BALB/c、BALB/CAnN、C3H、C3He、C3Hf、C3/H/HCN、C57L、C57BL、C57BL/6、C57BL/10、C57BL/6N、C57BL/KaLwN、C57BR、C58、C58/LWN、CBA/N、CBA/CaHN、DBA、DBA/2、DBA/1JN、D2/nSnN、LACA、L615、L6565、L7212、LS783、NZB/N、NZB×NZW、R111、RF、RS615、SJL、STR/N、STAR/N、SWR、昆明種、津638以及上述品種的雜交或衍生品種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝臟前體細(xì)胞的生產(chǎn)方法，步驟3）中所述傳代為傳代1-2次，優(yōu)選2次。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝臟前體細(xì)胞的生產(chǎn)方法，步驟4）中所述傳代為傳代1-5次，優(yōu)選2-3次。

6.一種細(xì)胞制品，其含有根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述方法生產(chǎn)的肝臟前體細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)胞制品，其中所述肝臟前體細(xì)胞不表達可檢測水平的造血干細(xì)胞標(biāo)志物，優(yōu)選所述造血干細(xì)胞標(biāo)志物選自：CD45、CD117和CD34中的一種或多種。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)胞制品，其中所述肝臟前體細(xì)胞的90%以上為間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物陽性，優(yōu)選所述間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物為CD44。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細(xì)胞制品，其中所述肝臟前體細(xì)胞為肝臟前體細(xì)胞標(biāo)志物陽性、和/或成熟膽管上皮細(xì)胞標(biāo)志物陽性和/或成熟肝實質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物陽性，

優(yōu)選所述肝臟前體細(xì)胞標(biāo)志物選自：AFP和DLK中的一種或多種；

優(yōu)選所述成熟膽管上皮細(xì)胞標(biāo)志物為CK-19；

優(yōu)選所述成熟肝實質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物為ALB。