[發明專利]一種檢測鹽酸克倫特羅化學發光檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201310551775.3
• 申請日: 2013-11-08
• 公開（公告）號: CN103728450A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 王善普;閆玉良;劉姍姍;劉歡;王宇東
• 申請（專利權）人: 洛陽萊普生信息科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時國珍

技術領域

本發明涉及免疫檢測領域，具體是涉及一種檢測鹽酸克倫特羅化學發光檢測試劑盒。?

背景技術

目前應用于檢測食用動物尿液、組織、血清中鹽酸克倫特羅的定量檢測技術主要有以下幾種方法：?

1、氣相色譜一質譜聯用法(Gc-Ms)

GC—MS可用于動物毛發、尿液及組織中克倫特羅等β—興奮劑的定性定量分析。在氣相—質譜測定克倫特羅的方法中檢測牛毛中CL的殘留，最低檢測限為5ng/g。利用喂食大白鼠克倫特羅獲得陽性生物材料，經O．Olmol/L鹽酸溶液提取克倫特羅，乙醚脫脂凈化，乙酸乙酯提取后蒸發至干，用乙醇溶解后加樣到氧化鋁柱上。用0．Olmol/L鹽酸溶液洗脫。蒸發至干后，用BSTFA(雙三甲基硅烷基三氟乙酰胺)+1％(ψ)TMCS(三甲基氯硅烷)衍生，最后采用GC-MS進行測定。克倫特羅回收率為75．5％，檢測低限為O.5ug/kg。

GC-MS法優點是能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性，定量分析，而且有較高的靈敏度。缺點是操作復雜，費時，成本高。?

2、高壓液相色譜法（HPLC)?

在檢測CL時，HPLC分析不需要將CL衍生化，且準確、快速、重復性好、假陽性率低，適用于定量檢測。β-腎上腺素能激動劑分子可與18C或8C固定相分子相互作用，所以反相柱常應用于HPLC技術中檢測β-激動劑類物質。HPLC適合測定熱不穩定和強極性的β-激動劑及其代謝產物，而且HPLC可以與柱前提取，純化及柱后熒光衍生化反應和質譜(MS)等系統聯用，容易實現分析過程的自動化。HPLC法可采用不同的檢測器，有電化學檢測器、紫外檢測器、光電二極管陣列檢測器和質譜檢測器。目前，中國己將HPLC法作為檢測CL殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1-15ng/g，但其缺點是檢測過程繁瑣，檢測時間長，需貴重儀器，難于操作，價格昂貴。

3、酶聯免疫（ELISA)?

HPLC或GC-MS一般處理步驟費用昂貴．而通常利用競爭酶標免疫法快速檢測試紙條（卡）進行檢測比較方便經濟，其測定基礎是競爭性抗原抗體反應。微孔包被有針對兔IgG(CLENbuerol抗體)的羊抗體。克倫特羅(CLENbuterol)抗體被加入，經過孵育及洗滌步驟后，加入CL與CL酶標記物競爭CL抗體，沒有連接的CL酶標記物通過洗滌被除去，用相應的酶底物顯色。根據樣品孔與標準孔的顏色對照判定結果。

ELISA較GC-MS和HPLC有其獨特的優越性：樣品前期處理比較簡單，檢測出的數據比較穩定，特異性強，檢測速度快；設備成本不高，易于推廣，靈敏度高，檢測限低于0.5ug/kg。用于EIA的CL抗體有多克隆抗體和單克隆抗體之分，應用多抗存在不同的交叉反應性，應用單抗則大大提高其反應特異性。目前，進口快速檢測試紙條（卡）大多應用多抗進行檢測。?

4、放射免疫分析技術(RlA)?

放射免疫分析法檢測鹽酸克倫特羅殘留具有很好的特異性和高靈敏度。1976年Ropitar和Zimmer首次報道用放射免疫分析法檢測β—腎上腺索激動劑。DelAhaut等人建立了更為特異的放射免疫方法，最低檢測限可達到O.5ng/g。國外已生產出運用RIA測定CL的快速檢測試紙條（卡），還建立了類似放射免疫分析法的放射受體分析法，這種方法是用受體代替抗體結合CL，檢測限可達2．4ng/g。國內在此方面的研究尚屬空白。但是RIA法存在著儀器價格昂貴，實驗條件要求苛刻，放射性同位素對環境和工作人員都不安全的缺點。

5、熒光免疫分析法(FIA)?

Bacigalupo?MA等(1995)利用單克隆技術與熒光免疫分析技術檢測了在牛的尿液中克倫特羅的殘留，其檢測限10ng/ml。相較放射免疫分析法，該法無輻射，只需對樣品進行比較簡單的處理，同時可以一次檢測多個樣品，但由于其熒光強度取決于激發波長。且對溫度強烈依賴，使其應用受到很大的限制。

6、毛細管區帶電泳法(CE)?