[發明專利]黑曲霉菌株及其孢子粉的制備方法

有效

• 申請號: 201310548819.7
• 申請日: 2013-11-07
• 公開（公告）號: CN103555593A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 周長春;張旭;葛英;劉金鳳
• 申請（專利權）人: 沂源康源生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;C12R1/685
• 代理公司: 青島發思特專利商標代理有限公司 37212
• 代理人: 耿霞

技術領域

本發明屬于微生物制品領域，具體涉及一種黑曲霉菌株及其孢子粉的制備方法。

背景技術

人類生存與農業可持續性發展己成為各國農業發展的主題。現代農業(增施水肥、改良品種、集約化栽培、化學化、機械化)的高投入高產出的掠奪式運作方式已經說明是極其有害的。實踐證明，將傳統農業與現代化農業緊密結合才有利于人類生存和發展。自80年代美國人提出根際促生菌以來，某些根際微生物對作物的促進作用是可以肯定的，具體作用主要有4個方面：①影響作物根細胞的滲透性；②影響根際代謝活動；③微生物對根分泌物的吸收作用；④改變營養物質對植物的有效性。

無論是微生物間的相互作用，還是微生物對植物的作用都是通過各種酶類及代謝產物作為介質而起作用的。雖然各國科學工作者對根際促生菌的生物學和生態學已做了大量研究，但對促生菌通過何種介質對作物及病原菌發生作用，尚無確切研究。因此，深入研究根際促生菌代謝產物對作物的生物活性及其分子結構特點有著十分重要的意義。一方面可以明確根際促生菌的作用機制，另一方面對仿生合成及微生物基因工程改造都有著十分重要的意義。特別是正向調控菌劑的研制成功，在理論與實際上都將有重大突破。

發明內容

本發明的目的是提供一種黑曲霉菌株，該菌種能夠促進作物的生長發育；本發明同時提供了黑曲霉菌株孢子粉的制備方法，簡單易行，適合工業化生產。

本發明所述的黑曲霉菌株是曲霉屬(Aspergillus)中的黑曲霉SDKYSW-2#，黑曲霉菌株已于2013年10月12日，保藏至中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，分類命名為黑曲霉(Aspergillusniger)，保藏號為CGMCC?No.8327。

黑曲霉菌株是從大棚（沂源）苗圃土壤中采用土壤稀釋分離法分離獲得。

本發明所述的黑曲霉菌株的篩選方法，包括以下步驟：

一、土樣采集：從土壤表層到15cm處取樣200g，一個地點采幾個樣本，混合過粗篩，取25g作分離用；

二、黑曲霉的分離：

1、儀器：

高壓蒸汽滅菌鍋、烘干箱、培養箱、電子天平、搪瓷杯、燒杯、分裝漏斗、試管、吸管(10ml)、吸爾球、玻璃棒、棉花、線繩、報紙、培養皿、三角瓶（100ml）、玻璃珠、移液器（1ml）、吸頭、藥勺、接種針、酒精燈。

2、藥品：

可溶性淀粉，磷酸二氫鉀，硫酸鎂，硫酸亞鐵，瓊脂，蔗糖，黑曲霉。

3、黑曲霉分離培養基的制備：

可溶性淀粉10g，磷酸二氫鉀0.5g，硫酸鎂0.1g，硫酸亞鐵0.1g，瓊脂10g，蔗糖10g，水500ml；將試劑稱好，加水放入搪瓷杯中，電爐上加熱溶解，用吸管(10ml)吸培養基10ml分裝試管中，塞好棉塞，用紙包好滅菌，備用。

培養基制作：試劑→溶解→校正PH值→分裝→加棉塞、包扎→滅菌（0.1P保溫30分鐘）→備用。

4、操作方法：

（1）準備工作：

將使用儀器培養皿、三角瓶、吸頭（若干）、藥勺、培養基、10ml試管等，用高壓滅菌鍋0.1p保壓30分鐘，滅菌備用。

三角瓶：裝入100ml水加入玻璃珠（若干）。

10ml試管：裝入9ml水，做好編號，塞好棉塞，8支，備用。

培養皿5個為一組，用報紙包好，6包30個。

1ml吸頭，每個單獨用報紙包好（若干）。

（2）菌樣稀釋分離：

將待分離的菌樣在無菌條件下，用接種針取1-2環，放入三角瓶中，瓶內菌液約含孢子50-100萬個/ml,充分振搖5分鐘左右，使孢子個個分離混勻，備用。

在接種箱內按無菌操作要求，用移液器吸取1ml三角瓶內菌液放入1號管，再從1號管吸1ml放入2號管，以此類推，直至稀釋至6號或7號試管內，要求每往試管吸一次換一次吸頭，每毫升稀釋液中約含孢子數5-10個之間。

取5號6號7號試管內菌液0.5毫升，放入培養皿中，每個稀釋度做10個平板，將培養基（溫度50℃）倒入培養皿中與菌液充分混勻，放平、冷卻。

大約20分鐘左右待培養皿內培養基凝固后取出，倒置放入培養箱內（30℃），培養4天后，即可在平皿培養基上觀察到以每個孢子為同心圓而生長的菌落，菌落大且孢子密度厚來篩選優良的菌株。

注意事項：

本操作一定要在滅過菌的無菌接種箱內進行，并嚴格按無菌操作要求進行。